[第四章DNA生物合成.pptVIP

第四章 DNA生物合成（DNA Biosynthesis） （复制） 第一节 DNA复制的基本规律 复制的方式—半保留复制 复制方向－双向复制 复制特点－半不连续复制 复制起始点和终点 复制的高保真性 复制的方式：半保留复制 DNA半保留复制的证据 双向复制 DNA复制时，DNA从起始点(ori)向两个方向解链，形成两个延伸方向相反的复制叉，称为双向复制。 复制起始点和终点 复制子：基因组中能独立进行复制的单位 复制起始点：复制子中控制复制起始的特定位点 复制终点：终止复制的特定位点 原核生物只有一个起始点和一个终点，故为单一复制子。 真核生物含有多个起始点，故有多个复制子。 复制的高保真性 DNA复制的高保真性要依赖三种机制 1.严格遵守碱基配对规律 2.DNA聚合酶对碱基具有选择功能 3.复制出错时，DNA聚合酶具有及时校读功能 第二节 真核生物DNA复制 (一)DNA复制所需的条件（复制体系）： 1、模板：母链DNA （即解开为单链状态的两条DNA母链） 2、底物：dNTP(dATP、dGTP、dCTP 、 dTTP) 3、聚合酶：全称：依赖DNA的DNA聚合酶（DDDP、 DNA-pol）简称DNA聚合酶 4、引物酶：合成RNA引物 作用:提供3′-OH 因为DDDP不能催化两个游离的dNTP 互相聚合，需一引物。 5、解旋解链的酶: 解链酶 拓扑异构酶 单链结合蛋白 6、DNA连接酶 DNA聚合酶的特点： 1.需要模板，才具有活性 2.需要引物，提供3’-OH 3.聚合方向，5’→3’ （三）引物酶 （四） 拓扑异构酶 拓扑异构酶的作用特点 即能水解、有能连接磷酸二酯键 （五）解螺旋酶 （六）DNA结合蛋白（单链结合蛋白） （七）DNA连接酶 （八）复制过程 真核生物和原核生物复制过程基本相似,分为三个阶段：起始 延长 终止 不同点： 1.复制速度慢 2.多个复制子 3.引物和冈崎片段均短 起始 需要解决两个问题： 1. DNA解开成单链，提供模板。 2. 合成引物，提供3?-OH末端。 ? 真核生物每个染色体有多个起始点，是多复制子复制。复制有时序性，即复制子以分组方式激活而不是同步起动。 ? 复制的起始需要DNA-polα（引物酶活性）和polδ（解螺旋酶活性）参与。还需拓扑酶和复制因子(replication factor, RF)。 ? 增殖细胞核抗原(proliferation cell nuclear antigen, PCNA)在复制起始和延长中起关键作用。 延长 终止 染色体DNA呈线状，复制在末端停止。 复制中岡崎片段的连接，复制子之间的连接。 染色体两端DNA子链上最后复制的RNA引物，去除后留下空隙。 （九）末端复制、端粒与端粒酶 末端复制：在线性DNA分子末端切除引物后，无法填补空缺，导致子代DNA分子比亲代短。 端粒酶(telomerase) 组成 端粒酶RNA (human telomerase RNA, hTR) 端粒酶协同蛋白(human telomerase associated protein 1, hTP1) 端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase, hTRT) 端粒酶的功能：合成端粒DNA 正常情况下，体细胞检测不到端粒酶，随着细胞的不断分裂，端粒不断缩短，缩短到一定程度触发凋亡系统，导致细胞凋亡，维持体细胞的更新代谢。故端粒可以作为细胞凋亡的信号，有人称为正常细胞的分裂钟。 端粒与衰老 实验：在无端粒酶活性的成纤维细胞中表达端粒酶时，端粒的缩短和细胞的衰老都受到抑制。 体外培养的细胞端粒的长度随细胞逐代相传而缩短，丢失到一定程度便失去对染色体的保护作用。细胞随之发生衰老和死亡。 结论：细胞的衰老是由端粒驱动的。 可把端粒看成一面钟，端粒的长度是钟上的刻度，记载了细胞分裂的次数，称为“端粒钟”，或“有丝分裂钟” 或“生命的时钟”，可通过测定端粒的长度预测细胞的寿命。 胚胎细胞和生殖细胞端粒的长度并不随细胞分裂次数的增加而缩短，具有无限的分裂能力，原因在于端粒酶的存在。 端粒酶与肿瘤 人体内除了生殖细胞和少数一些体细胞如淋巴细胞等细胞外，绝大多数体细胞中无法检测到端粒酶的活性，而在多数肿瘤细胞中能检测到端粒酶的活性(84%)。 肿瘤的端粒长度很短，其继续缩短导致染色体融合、细胞死亡，而端粒酶的激活可以维持端粒的长度，维持肿瘤的继续分裂、增殖。 端粒酶的表达可能是肿瘤形成和发展的共同途径。 端粒酶与恶性肿瘤之间有相关