动力学亲和力分析分析.pptVIP

动力学/亲和力分析 基础知识介绍 什么是动力学和亲和力? 动力学 反应发生的速度? – 与时间相关 结合 – 分子间结合的速度 解离 – 分子复合物解离的速度 动力学分析能够确定在一个给定的时间跨度内，分子复合物是否能够结合还是完全解离 亲和力 分子间结合的强度? – 与时间无关 亲和力分析能够确定反应处于平衡状态（结合与解离形成动态平衡）时，复合物的浓度 同样的亲和力，不同的动力学 所有4个化合物的亲和力数据相同 KD = 10 nM = 10-8 M 结合动力学常数可有不同数量级范围内的改变，本例中为4个数量级 用Biacore获得动力学和亲和力数据的3种方式 监测结合和解离速率 亲和力 动力学 监测稳态水平 亲和力 动力学 监测溶液中游离的分析物分子 亲和力 动力学 1:1 动力学模型的速率方程 平衡常数(Equilibrium constants) Biacore中的平衡和动力学 A 是溶液中的待分析物(analyte) A的游离浓度由流动系统控制，在检测中保持恒定 AB 是结合复合物 AB的浓度可通过直接检测RU得到，表示为R B 是偶联在传感芯片上的分子 总浓度能用 RU表示, 相当于最大结合反应理论值 Rmax