博士论文答辩重点.ppt

美味猕猴桃根保肝活性及成分的研究 白新鹏 猕猴桃属植物研究概况 猕猴桃属主要化学成分 猕猴桃属的生理功能 猕猴桃根的化学成分研究概况 1、黄初升 等 对毛花猕猴桃根进行了提取、分离得到8种物质：齐墩果酸、乌苏酸、2β, 3β-二羟基-23-氧代-12-烯-28-乌苏酸，2α，3β，23-三羟基-12-烯-28-乌苏酸，2α，3β-二羟基-12-烯-28-乌苏酸，2α，3β，24-三羟基-12-烯-28-乌苏酸，二十四碳酸，葡萄糖等 2、覃益民 等 从中越猕猴桃根中分离得到5个化合物：2α，3α，24-三羟基-12-烯-28-乌苏酸(Ⅰ)，2β，3β，23-三羟基-12-烯-28-乌苏酸(Ⅱ)，24-hydroxytormentric acid (Ⅲ) 熊果酸(Ⅳ)，和β-谷甾醇(Ⅴ)等 3、李典鹏 等 从中越猕猴桃的根部分离得到6个化合物: 2α,3α,24-三羟基-12-烯-28-齐墩果酸(Ⅰ), 2α,3α-二羟基-12-烯-28-乌苏酸(Ⅱ), 2α,3α,19α-三羟基-12-烯-28-乌苏酸(Ⅲ), 熊果酸(Ⅳ), β-谷甾醇(Ⅴ),和β-胡萝卜甙(Ⅵ)。 4、金永日 等，从软枣猕猴桃根中分得4个化合物： β-谷甾醇, 毛花猕猴桃酸Ｂ, 2α,3α,24-三羟基-12-烯-28-乌苏酸和胡萝卜苷。 5、李平亚 等 从狗枣猕猴桃根中，分离得到两个白色单体。经光谱分析和化学方法鉴定为Δ7-豆甾烯醇和具有生物活性的化合物，其结构为2，3-二--O一β-D一半乳糖基一α－D一半乳糖，命名为狗枣三糖 猕猴桃根的药理活性 国内外研究概况小结 课题的研究背景和意义 主要研究内容 保肝的活性部位确定试验方法 猕猴桃根提取工艺 各溶剂提取物抗氧化活性 各溶剂提取物保肝活性 不同剂量的EE6对CCl4肝损伤的影响 小鼠肝细胞的组织病理学检查 EE6各级萃取部分的抗氧化活性 EE6各级分CCl4肝损伤活性 小 结 (一) 三萜化合物定性反应 TLC分离条件的选择 TLC最佳条件的展开效果 分光光度法测定总三萜 分光光度法测定总三萜 分光光度法测定总三萜 分光光度法测定总三萜 HPLC测定oleanolic acid HPLC测定oleanolic acid HPLC测定oleanolic acid 实际样品总三萜和oleanolic acid含量测定 实际样品总三萜和oleanolic acid含量测定 小 结(二) 微波辅助提取设备 微波辅助提取方法 提取过程优化方法 单因素影响实验 单因素影响实验(1) (2) 单因素影响实验(3) (4) 单因素影响实验(5) (6) 析因试验 析因试验 析因试验 最速上升试验 Box-Behnken中心组合试验 Box-Behnken中心组合试验 Box-Behnken中心组合试验 Box-Behnken中心组合试验 最佳实验条件验证 小 结 (三) 树脂纯化三萜所用材料 树脂纯化实验内容 静态吸附实验 静态吸附实验 静态吸附实验 静态吸附实验 静态吸附实验 静态吸附实验 静态吸附实验 静态吸附实验 动态吸附实验 动态吸附实验 动态吸附实验 最佳条件纯化产品结果 最佳条件纯化产品结果 小 结 (四) 单体活性物质的纯化工艺 柱层析分离条件 硅胶柱层析分离结果 硅胶柱层析分离结果 硅胶柱层析分离结果 单体活性物质的纯化结果 单体化合物的结构表征 熔点 紫外光谱 红外吸收光谱 高效液相谱 液-质色谱 核磁共振谱 (1H-NMR、 13C-NMR、DEPT谱 ) 四个单体化合物的熔点 化合物I ：291-292 ℃ 化合物II ：283-287 ℃ 化合物III ：308-310 ℃ 化合物IV ：312-315 ℃ 四个单体化合物的紫外光谱 四个单体化合物的红外光谱 四个单体化合物的ES-质谱图 四个单体化合物的1H-NMR谱 四个单体化合物的13C-NMR谱 化合物的DEPT-NMR图谱 13C-NMR谱化学位移数据 化合物的结构表征 单体化合物与总三萜保肝活性比较 小 结 (五) 主要结论 主要结论 主要创新点 荧光试剂合成 树脂纯化工艺 上样浓度对动态吸附的影响 上样流速对动态吸附的影响 结果：上样浓度为2.5-3.0 mg/ml ；流速为5 ml/min时比较理想 荧光试剂合成 树脂纯化工艺 不同浓度的丙酮洗脱效果 洗脱曲线 结果：70 %丙酮洗脱效果最好，其洗脱峰集中，对称性较好 最佳洗脱剂用量是6倍的柱体积，基本可将吸附的三萜洗脱下来 洗脱液的选择和洗脱曲线的绘