急性毒性试验设计-1.pptVIP

急性毒性试验设计 一、急性毒性 急性毒性指人或动物一次或24 h之内多次接触外源化学物后，在短期内所发生的毒性效应，包括致死效应。 一次：指瞬间给实验动物染毒，如经口、经静脉注射染毒。 24 h之内多次：指外源化学物毒性过低，需给予动物较大剂量。 急性毒性效应出现的快慢和毒性反应的强度与外源化学物的性质和染毒剂量的大小有关。 如：丙烯腈，过氧化二碳酸二环己酯 丙烯腈经口急性毒性试验设计 实验目的 评价丙烯腈的毒性作用，求出半数致死量LD50，并根据LD50进行急性毒性分级， 掌握实验动物随机分组的方法和经口灌胃的技术。 观察丙烯腈急性中毒症状；为后续试验提供依据；为毒理学机制研究提供线索。 器材与试剂 1、实验动物 ICR小鼠（健康成年小鼠） 2、实验器材 灌胃针、注射器、吸管、容量瓶、烧杯、滴管、电子天平、动物体重秤、外科剪刀、镊子 3、实验试剂 丙烯腈、苦味酸酒精饱和液、伊红染液 实验方法 1、实验动物的选择 2、剂量设计及随机化分组 3、受试物的配制 4、染毒途径的选择 5、毒性反应的观察与LD50的计算 6、急性毒性的评价 1、物种和品系 对外源化学物毒性反应与人近似易于饲养管理 方便实验 操作易于获得 繁殖生育力强 数量较大能够保障 品系纯化，价格低廉。 2、 实验动物的年龄与体重 动 物　　 大鼠 小鼠 豚鼠 兔　 犬 猫 成年年龄（周） 3 2 2 3~4 3~4 3~4 体重（克） 150 15 250 1.5kg 7~15kg 1kg 寿命（年） 2~3 2~3 6~8 4~9 15~20 10~12 动物数量：动物6组，1-5组为实验组，6组为蒸馏水对照组 性别：雌雄各半 年龄：成年动物 生理与健康状况：未产未孕者、健康动物 实验动物的预检 实验动物的给药前禁食处理。 健康动物标志 发育正常、体态丰满、外观无畸形； 被毛浓密、贴顺有光泽、不蓬乱； 胸阔宽阔、脊柱不弓不弯； 眼睛明亮； 表皮无溃疡、无结痂（注意尾巴）； 各天然孔干净、无分泌物； 行动灵活、反应敏捷。 实验动物的标记 染色法 编号方法：小鼠头部为1号，顺时针编号，用苦味酸编个位数，用伊红编十位数。 染色法 优点： 简单方便，不痛苦，无损伤。 缺点： 时间较长时，染色剂易褪色； 标记容易模糊不清。  剂量选择及分组 剂量选择 广泛查阅文献资料，估计毒性中值 预试，求出待测化学物0 %~100 %或 10 %~90 %的大致致死剂量范围 设计正式试验的剂量和分组 随机化分组 将实验动物编号，从随机数字表上任意横行或纵行的任意数字开始，顺序取下数字，标于每个动物号下，然后用计划组数去除随机数字，所得余数即为所属组别。 以20只动物的完全随机分配为例 完全随机分配后各组所属动物号 20只动物完全随机分配的结果 受试物的配制方法 （1）受试化学物的量取： 固体受试物用称量法，液体受试物用称量法或吸量法。 称量法：取一定量的受试物放入已知重量的容器内，称重，定容，计算浓度mg/ml，备用。 吸量法：依设计剂量计算出应吸取液态受试物的容积，加入容量瓶中，用溶剂加至刻度。 吸量法，计算公式为：X＝ 式中： X——应吸取受试物的容积； A——设计要求的受试物浓度（ mg/ml ）； V——容量瓶容积（ml）； d——受试化学物比重； 受试物的配制方法 （2）受试化学物的稀释 等浓度稀释法： 等容量稀释法： 染毒途径的选择 经消化道染毒：经口灌胃法 采用专用小鼠灌胃针。 左手抓住动物双耳后至背部的皮肤，将动物固定成垂直体位，腹部面向操作。 右手持注射器，将针头由动物口腔侧插入，避牙齿，沿咽后壁缓缓滑人食管。若遇阻力，可轻轻上下滑动探索，一旦感觉阻力消失，即深人至胃部。 如遇动物挣扎，应停止进针或将针拔出，千万不能强行插入，以免穿破食，甚至误入气管，导致动物 立即死亡。 观察指标 中毒症状：确定靶器官 ① 行动：不安定、多动、发声； ② 神经系统反应：举尾、振颤、痉挛、运动失调、姿态异常； ③ 自主神经系统反应：眼球突出、流涎、流泪、排尿、下泻、竖毛、皮肤变色、