原卟啉的测定重点.ppt

实验四 荧光法测定原卟啉（FEP）的浓度 一、目的： 一、掌握荧光测量的基本原理，学会使用930荧光计。 二、了解原卟啉的测定方法。 二、原理： 1 激发光谱与发射光谱 萘的激发和荧光光谱 2、荧光光度计 3、930荧光计 三、实验器材与试剂 1、930荧光计 2、玻璃器材：比色管10ml，六支 移液管10ml，5ml各一只 4、原卟啉标准溶液0.1μg/ml，临用时新鲜配置，注意蔽光 5、依次加0.5NHCl 四、实验步骤 1、取五支比色管依次加原卟啉标准溶液：0、0.5、1.0、1.5、2.0ml第六支加未知液1.2ml 2、依次加0.5NHCl 4、3.6、3.0、2.5、2.0、2.8ml 测定方法：将5号标准溶液倒入比色皿中确定其荧光强度大于80（一般为95％），0～4号标准溶液依次倒入比色皿中（浓度由低到高），再将6号待测液倒入比色皿中分别测出他们的相对荧光强度。 测定条件： 激发滤光片： 400nm（通带型） 荧光滤光片：550nm （截至型） 灵敏度：2～3档 室温、室内照明：暗 五、注意事项 1、原卟啉对光热不稳定，易产生分解，应注意避光并冷藏。 2、荧光分析用的比色皿四面透明，用时应拿棱角处。 3、满度电位器顺时针方向开足后，即使指针调不到“100”，也不能强行旋转，此电位器容易损坏。 六、思考题 1、能否用930荧光计测原卟啉的激发光谱和荧光光谱？为什么？ 2、930荧光计上的满度开关与722分光光度计上的满度开关在测定过程中的作用是否相同？ * * 危丽俊 卫生化学教研室 4、定量方法 If = 2.3 ? I0 ? l c = Kc