实验三大肠杆菌感受态细胞的制备及质粒转化和检测.pptVIP

生物科学与工程系生物化学实验教学研究室 大连理工大学 环境与生命学院 实验三 大肠杆菌感受态细胞的 制备及质粒转化和检测 指导老师：苏 乔 副教授 电话606 概 述 1、感受态细胞 具有摄取外源DNA的能力 冰预冷的Cacl2溶液处理；短暂热休克 DH5α JM109 2、转化率 衡量感受态细胞的质量 菌落数/μg质粒DNA 通常为105-108 3、设立对照： 受体菌对照组（只加入受体菌） DNA对照组（只加入DNA ） 阳性对照（加入标准的质粒DNA制品） 4、蓝、白斑筛选 技术要点及注意事项 1、掌握好细胞密度，一般在A600为0.4左右为好 2、无菌操作 3、0-4℃条件下进行操作 4、热激时间要严格掌握 5、将X-gal和IPTG涂布于平板表面需至少提前3-4h准备 6、于4℃将平板放置数小时，可使蓝色充分显现 思 考 题 1、如何检测感受态细胞的质量？ 2、为什么转化后要在37℃摇床上温育45min再将菌悬液涂布到含有Amp的LB琼脂平板上？ 3、pUC118质粒和pUC118-GUS质粒的转化结果有何不同？ 经典失误集锦 1、未在超净工作台上取菌离心 2、玻璃涂布器过热 再 见 ！ 生物科学与工程系生物化学实验教学研究室 大连理工大学 环境与生命学院