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基因工程巩固练习 2016.4 判断题： 1.限制酶不止一种，是一类酶的总称（ ） 2.限制酶的化学本质是蛋白质，其作用的发挥需要适宜的外界条件，高温、强酸或强碱均易使之变性失活（ ） 3.不同的DNA分子用同一种限制酶切割产生的黏性末端都相同，同一个DNA分子用不同的限制酶切割，产生的黏性末端一定不同（ ） 4.限制酶切割位点应位于标记基因之外，不能破坏标记基因，以便于进行检测（ ） 5.基因工程中的载体与细胞膜上控制物质运输的载体不同。基因工程中的载体是DNA分子（例如土壤农杆菌细胞中存在的Ti质粒），能将目的基因导入受体细胞内；细胞膜上的载体化学本质是蛋白质，与细胞膜的通透性有关（ ） 6.基因工程中有3种工具，但工具酶只有2种（ ） 7.检测到受体细胞含有目的基因就标志着基因工程操作的成功（ ） 8.用含抗生素抗性基因的质粒作为载体是因为其抗性基因容易与外源基因连接（ ） 9.要合成糖蛋白或有生物活性的胰岛素可将目的基因导入大肠杆菌（ ） 10.将人的血清蛋白基因导入动物的乳腺细胞中，能够获得人的血清白蛋白（ ） 11.应用DNA探针技术，可以检测转基因抗浇灌番茄植株中目的基因的存在及其表达（ ） 12.重组Ti质粒侵染植物细胞后，便整合到其染色体上（ ） 二、简答题: 1.基因工程利用某目的基因（图甲）和P1噬菌体载体（图乙）构建重组DNA（图丙），已知限制性核酸内切酶的酶切位点分别是BglⅡ（A↓GATCT）、EcoRⅠ（G↓AATTC）和Sau3AⅠ（↓GATC）。请分析回答： （1）若要得到图丙所示重组DNA，对目的基因和P1噬菌体载体处理方法是（ ） A．用EcoRⅠ切割目的基因和P1噬菌体载体 B．用BglⅡ和EcoRⅠ切割目的基因和P1噬菌体载体 C．用BglⅡ和Sau3AⅠ切割目的基因和P1噬菌体载体 D．用EcoRⅠ和Sau3AⅠ切割目的基因和P1噬菌体载体 （2）若用你选择的限制酶切割P1噬菌体载体后，P1噬菌体载体上产生的游离的磷酸基团数为 个。 （3）BglⅡ和Sau3AⅠ两种限制酶识别的完整的DNA片段分别是 、 ，切割后产生的末端分别是 、 。 （4）在基因工程中，同一个DNA分子用不同的限制酶切割，产生的黏性末端是否肯定不相同？ 。 2．下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，圈l、圈2中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答下列问题： （1）一个图1所示的质粒分子经Sma Ⅰ切割前后，分别含有 个游离的磷酸基团。 （2）若对图中质粒进行改造，插入的SmaⅠ酶切位点越多，质粒的热稳定性越 。 （3）用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒，不能使用Srna Ⅰ切割，原因是 。 （4）与只使用EcoR I相比较，使用BamH Ⅰ和Hind Ⅲ两种限制酶同时处理质粒、外源DNA的优点在于可以防止 。 （5）为了获取重组质粒，将切割后的质粒与目的基因片段混合，并加入 酶。 （6）重组质粒中抗生素抗性基因的作用是为了 。 （7）为了从cDNA文库中分离获取蔗糖转运蛋白基因，将重组质粒导入丧失吸收蔗糖能力的大肠杆菌突变体，然后在 的培养基中培养，以完成目的基因表达的初步检测。 3.嗜热土壤芽胞杆菌产生的β-葡萄糖苷酶（BglB）是一种耐热纤维素酶，为使其在工业生产中更好地应用，开展了以下试验： Ⅰ.利用大肠杆菌表达BglB酶 （1）PCR扩增BglB基因时，选用_____的基因组DNA作模板。 （2）图1为质粒限制酶酶切图谱。BglB基因不含图中限制酶识别序列，为使PCR扩增的BglB基因重组进该质粒，扩增的BglB基因两端需分别引入______和______两种不同的限制酶的识别序列。 （3）大肠杆菌不能降解纤维素，但转入上述建构好的表达载体后则获得了降解纤维素的能力，这是因为______。 Ⅱ．温度对BglB酶活性的影响 （4）据图2、3可知，80℃保温30分钟后，BglB酶会______；为高效利用BglB酶降解纤维素，反应温度最好控制在______（填选项）。 A.50℃ B.60℃ C.70℃ D.80℃ Ⅲ．利用分子育种技术提高BglB酶的热稳定性 原理：在PCR扩增bglB基因的过程中，加入诱变剂可提高bglB基因的突变率。经过筛选，可获得能表达出热稳定性高的BglB酶的基因。 （5）与用诱变剂直接处理嗜热土壤芽胞杆菌相比，上述育种技术获得热稳定性高的BglB酶基因的效率更高，其原因是在PCR过程中______（多选）。 A．仅针对BglB基因进行诱变 B．BglB基因产生