双水相萃取技术现状与应用技巧.docVIP

双水相萃取技术研究现状与应用 张琼琼 天津科技大学 摘要：双水相萃取技术是一种新型的高效温和的用于提取、分离、纯化的技术，目前的研究证明双水相萃取已经应用于生物分子分离、污水处理、贵金属分离、生物合成、检测等方面，而且由于其本身的易于扩大，成本低、快速、高效等优势，应用前景会更加广阔。 关键词：双水相萃取；提取；分离；纯化 随着基因工程、蛋白质工程、细胞培养工程、代谢工程等高新生物技术研究工作的广泛展开，各种生化新产品不断涌现，但由于大部分的生物产品原液是具有低浓度和生物活性的，对分离条件以及环境要求及其苛刻，使得传统的液液萃取已不能适应分离要求，因此一种新型的液液分离技术--双水相萃取技术应运而生。双水相萃取技术是利用组分在两水相间分配的差异而进行组分的分离提纯的技术。由于双水相萃取分离过程条件温和、可调节因素多、易于放大和操作，并可借助传统溶剂萃取的相关理论和经验，不存在有机溶剂残留问题，特别适用于生物物质的分离和提纯。目前，双水相萃取技术已被广泛应用于医药化学、细胞生物学、生物化工和食品工业等领域，被认为是生物下游工程中具有广阔前景的分离技术。 目前国内外对双水相萃取技术的研究主要集中在：(1)双水相体系成相机理及热力学模型的探索。由于双水相体系自身的复杂性，目前还没有一套完整的理论来解释双水相体系，近年来对双水相液．液 相平衡的热力学模型的研究非常活跃；(2)新型、高效、廉价的双水相体系的开发。如用低分子有机物与无机盐所形成的双水相体系来分离提取中草药。这种双水相体系的引人，可以大大节约能耗，降低成 本，简化操作流程，提高产品收率，为大规模工业化的实现提供了可能；(3)双水相萃取技术应用领域的拓展，利用其它相关技术对双水相萃取过程优化。如双水相技术与相关技术的集成问题，就充分地利用了双水相体系的技术和条件优势，为分离科学提供了新思维；(4)双水相萃取技术中体系的放大以及新工艺流程的开发等[1]。 1 双水相萃取技术 1.1 双水相体系的形成 早在1896年，Beijerjnck[2]观察到，明胶与琼脂或明胶与可溶性淀粉溶液混合时，得到一种不透明的混合溶液，静置后可分为两相，上相中含有大部分的明胶，下相中含有大部分琼脂（或淀粉），这种现象被称为聚合物的不相容性，从而产生了双水相。例如将2.2%（质量分数）的葡聚糖水溶液与0.72%的甲基纤维素的水溶液等体积混合静置后，可以得到两个液层，下层含有71.8%的葡聚糖，上层含有90.3%的甲基纤维素，两相的主要成分都是水。 1.2 双水相体系类型 在双水相体系中，常见的水溶性高聚物有：聚乙二醇（PEG）、聚丙二醇、甲基纤维素、聚丙烯乙二醇、吐温、聚氧乙烯类表面活性剂等；聚乙二醇/葡聚糖和聚乙二醇/无机盐是常用的双水相体系，由于葡聚糖价格昂贵，聚乙二醇/无机盐体系应用更为广泛，现把几种常见的双水相体系列于表1。 表1 常见的双水相系统 类型 上相的组分 下相的组分 非离子型聚合物/非离子型聚合物 聚丙二醇 甲基聚丙二醇，聚乙二醇，聚乙烯醇，聚乙烯吡咯烷酮，羟丙基葡聚糖 聚乙二醇 聚乙烯醇，聚乙烯吡咯烷酮，葡聚糖，聚蔗糖 乙基羟乙基纤维素 葡聚糖 甲基纤维素 葡聚糖，羟丙基葡聚糖 非离子型聚合物/无机盐 聚丙二醇 硫酸钾 聚乙二醇 硫酸镁，硫酸钾，硫酸铵，硫酸钠，甲酸钠，酒石酸甲钠 高分子电解质/高分子电解质 硫酸葡聚糖钠盐 羧甲基纤维素钠盐 羧甲基葡聚糖钠盐 羧甲基纤维素钠盐 非离子型聚合物/低分子量组分 葡聚糖 丙醇 聚丙烯乙二醇 磷酸钾，葡萄糖 甲氧基乙二醇 磷酸钾 1.3 双水相萃取的基本原理[3] 双水相萃取与一般的水．有机物萃取的原理相似，都是依据物质在两相间的选择性分配。当萃取体系的性质不同，物质进入双水相体系后，由于分子问的范德华力、疏水作用、分子间的氢键、分子与分 子之间电荷的作用，且标物质在上、下相中的浓度不同，从而达到分离的目的。溶质(包括蛋白质等大分子物质、稀有金属以及贵金属的络合物、中草药成分等)在双水相体系中服从Nernst分配定律： K=Ci/Cb，其中Ci、Cb分别代表溶质在上相、下相中的浓度。 系统固定时，分配系数为一常数，与溶质的浓度无关。当目标物质进人双水相体系后，在上相和下相同进行选择性分配，这种分配关系与常规的萃取分配关系相比．表现出更大或更小的分配系数。如 各种类型的细胞粒子、噬菌体的分配系数都大于100或者小于，因此为物质分离提供了可能。 1.4 影响物质分配平衡的因素 影响物质在双水相体系中分配的因素有很多，其中主要包括体系有机相组成(如有机物的类型、平均分子量等)、盐类(包括离子类型和浓度、电荷数、电解质强度、酸碱性等)、相比R(上下