4微生物培养基(下)课件.pptVIP

4.3.1 培养基成分选择的原则 4.3.2 培养基的优化（正交实验） 4.3.3 培养基设计时注意的一些相关问题 * * 4.3 培养基的设计与优化 成分最佳配比 从生化反应的基本原理来推断和计算？ 经验 配方实验 4.3.1.1 菌种的同化能力 选用大分子原料时，应首先考虑微生物是否具有相应的水解酶。否则，只能利用简单物质。 分泌型水解酶 例如：酵母菌最多只能利用2-3糖，不能利用淀粉等多糖。所以酿酒等工业必须先将淀粉质原料糖化。 糖化：淀粉 葡萄糖 淀粉水解糖： 主要成分： 葡萄糖 次要成分： 二糖、三糖等低聚糖；脂肪、蛋白等杂质。 低聚糖存在的危害： 降低原料利用率；抑制微生物生长；降低发酵液可发酵营养成分；增加黏度 影响淀粉水解糖质量的因素： 原料质量； 水解工艺与设备。 淀粉水解糖制备工艺： 酸法；酸酶法、双酶法。 N源：许多微生物缺乏蛋白酶，不能直接利用蛋白质等作氮源， 可先将蛋白质人工水解为氨基酸液。 常用的蛋白质水解液: 棉籽饼水解液 血蛋白水解液 豆饼水解液 在配制培养基时，应根据微生物的特性和培养目的，注意快速利用的碳(氮)源和慢速利用的碳(氮)源的相互配合，发挥各自的优势,避其所短。 4.3.1.2 代谢的阻遏与诱导 葡萄糖效应：速效碳源葡萄糖被菌体利用时产生的分解代谢产物会阻遏或抑制某些产物合成所需的酶系的形成或酶的活性。 种子培养基所含的速效碳氮源往往比作为发酵培养基多。 酶制剂生产：对许多诱导酶来说，易被利用的碳源不利于产酶，而难被利用的碳源(如淀粉、糊精等)对产酶是有利的。 因而淀粉糊精等多糖也是常用的碳源，特别是在酶制剂生产中几乎都选用淀粉类原料作为碳源。 能分泌蛋白酶的菌株，在有机氮源上可很好生长。 同一菌株在不同的生长阶段对氮源的利用能力不同，在生长早期利用容易同化的铵盐和氨基氮，在生长中期则由于代谢酶系已形成则利用蛋白质的能力增强。 有些产物会受氮源的诱导与阻遏，蛋白酶生产尤为明显。 通常蛋白酶的生产受蛋白质或多肽的诱导，而受铵盐、硝酸盐、氨基酸的阻遏。这时在培养基氮源选取时，应考虑以有机氮源(蛋白质类)为主。 4.3.1.3 合适的C、N比 C,N,C/N都需要适当 C源：碳架，能源N源 C/N=100：（0.2-2.0） 碳氮比也随碳源及氮源的种类以及通气搅拌等条件而异，因此很难确定一个统一比值。 4.3.1.4 pH的要求 微生物在利用营养物质后，由于酸碱物质的积累或代谢酸碱物质的形成会造成培养体系pH的波动。 发酵过程中调节pH的方式一般不主张直接用酸碱来调节： 因为培养基pH的异常波动常常是由于某些营养成分的过多(或过少)而造成的，因此用酸碱虽然可以调节pH，但不能解决引起pH异常的原因,其效果常常不甚理想。 4.3.2 培养基的优化 培养基设计过程: ①、根据前人的经验，初步确定可能的培养基成分; ②、通过单因子实验最终确定出最适宜的培养基成分; ③、当培养基成分确定后,剩下的问题就是各成分最适的浓度,由于培养基成分很多,为减少实验次数常采用一些合理的实验设计方法。 具体分为四步: ①、根据问题的要求和客观的条件确定因子和水平，列出因子水平表; ②、根据因子和水平数选用合适的正交表，设计正交表头，并安排实验; ③、根据正交表给出的实验方案，进行实验; ④、对实验结果进行分析，选出较优的实验条件以及对结果有显著影响因子。 4.3.2.2.1 正交实验设计 举例: 确定赖氨酸产生菌FB31发酵培养基成分玉米浆、豆饼水解液、硫酸铵适宜浓度及其对发酵的影响。 解: 利用正交设计安排实验并分析结果。 (1)、确定因子和水平，列出因子水平表根据经验，豆饼水解液、玉米浆和硫酸铵的浓度变化见表，共3个因子每个因子取三个水平。 K1,k2,k3之间的差异是由于各因子取三个不同的水平导致. (3) 实验结果及分析 正交实验结果的统计分析方法有极差分析法与方差分析法两种。 3、培养基设计在发酵过程优化控制中的作用和地位 分批发酵可分两个阶段: 生长