6 酵母核糖核酸的分离及组分鉴定课件.pptVIP

一、目的： 1. 了解核酸的组分; 2. 掌握鉴定核酸组分的方法。 二、原理： 酵母核酸中RNA的含量较多。RNA可溶于碱溶液， 在碱提取液中加入酸性乙醇溶液可以使解聚的核糖核酸 沉淀，由此即得到RNA的粗制品。 核糖核酸含有核糖，嘌呤碱，嘧啶碱和磷酸各组分。 加硫酸煮沸可使其水解，从水解液中可以测出上述组分 的存在。 四、试剂与材料： 四、试剂与材料： 五、操作方法：酵母核糖核酸的分离 五、操作方法：酵母核糖核酸的组分鉴定 * 酵母核糖核酸的分离及组分鉴定 1. 乳钵 2. 150毫升锥形瓶 3. 水浴 4. 量筒 5. 吸管，滴管 6. 试管及试管架 7. 烧杯，漏斗 8. 离心机 酵母核糖核酸的分离及组分鉴定 三、器材： 1. 0.04mol/L 氢氧化钠溶液 1000ml 2. 酸性乙醇溶液 500ml 3. 95%乙醇 1000ml 4. 乙醚 500ml 5. 3当量/升硫酸 200ml 6. 浓氨水 50ml 7. 0.1mol/L硝酸银溶液 50ml 8. 三氯化铁浓盐酸溶液 80ml 9. 苔黑酚乙醇溶液 10ml 10. 酵母粉 四，试剂和材料： 酵母核糖核酸的分离及组分鉴定 酵母核糖核酸的分离及组分鉴定 11. 定磷试剂 50ml （1）17%硫酸：将17毫升浓硫酸（比重1.84）缓缓加入到83毫升水中。 （2）2.5%钼酸铵溶液： 2.5g钼酸氨溶于100ml水中。 （3）10%抗坏血酸溶液：10g抗坏血酸溶于100ml水中，贮存棕色瓶保存。溶液呈淡黄色时可用，如呈深黄色或棕色则失效，需要纯化抗坏血酸。 临用时将上述3种溶液与水按如下比例混合。 17%硫酸：2.5%钼酸铵溶液：10%抗坏血酸溶液：水=1：1：1：2（V:V） 酵母核糖核酸的分离及组分鉴定 将7.5g酵母悬浮于45毫升0.04mol/L氢氧化钠溶液中，并在乳钵中研磨均匀。将悬浮液转移至150ml锥形瓶中。在沸水浴上加热30分钟后，冷却。离心（3000转/分）15分钟将上清液缓缓倾入15毫升酸性乙醇溶液中。注意要一边搅拌一边缓缓倾入。待核糖核酸沉淀后，离心（3000转/分）3分钟。弃去清液。用95%乙醇洗涤沉淀2次，乙醚洗涤沉淀1次后，沉淀在空气中干燥。 将提取的核酸，加入3当量/升的硫酸5ml，在沸水浴中加热10分钟制成水解液并进行组分的鉴定。 五，操作方法： 酵母核糖核酸的分离及组分鉴定 1. 嘌呤碱： 取水解液1ml加入过量浓氨水，然后加入约1ml 1mol/L的硝酸银溶液，观察有无嘌呤碱的银化合物的沉淀。 2. 核糖：取1支试管加入水解液1ml，三氯化铁浓盐酸溶液2毫升和苔黑酚乙醇溶液0.2毫升。放沸水浴中10分钟。注意溶液是否变成墨绿色，说明核糖的存在。 3. 磷酸：取一支试管，加入水解液1ml和定磷试剂1ml。在水浴中加热，观察溶液是否变成蓝色，说明磷酸是否存在。 酵母核糖核酸的分离及组分鉴定 (一）RNA的提取： 酵母粉7.5g (减半)加0.2％NaOH45ml（减半） 研磨均匀 悬浮液移至锥形瓶（100ml） 沸水浴30分 离心15分（3000转分） 取上请液 将上请液缓缓倾入30mL酸性乙醇溶液中，边加边搅拌，待核酸完全沉淀后 离心取沉淀物（由于时间短，不做洗和抽，此沉淀物即为RNA粗品，可做组分鉴定用） （二）RNA