实验4 酵母RNA的分离及组分鉴定课件.pptVIP

酵母RNA的分离及鉴定 一、实验目的 掌握核酸分离纯化的方法 掌握用苔黑酚法鉴定RNA组份的原理和方法 三、实验器材与试剂 1、器材： 干酵母粉，天平，抽滤瓶、布氏漏斗、真空泵、离心机 2、试剂： ① 0.04 mol/L氢氧化钠 ②酸性乙醇：乙酸（A?R）， 95%乙醇 ③无水乙醚（C?P） ④氨水（C?P） ⑤ 1.5mol/L硫酸 ⑥ 5%硝酸银 ⑦苔黑酚―三氯化铁试剂 五、实验结果与分析 1、提取的RNA量； 2、RNA组份鉴定结果。 分析： 如何提高分离的酵母RNA的量？ 组份鉴定结果是否与预期一致？出入的原因有哪些？ 思考题：RNA的分离提取还有哪些方法？ * * * 二、实验原理 酵母核酸中 RNA 含量较多。在细胞中除了核酸外还有 Pr、多糖及其他多种化合物； RNA可溶于碱性溶液，在碱性提取液中加入酸性乙醇溶液可以使 RNA 析出； RNA是由核糖、嘌呤/嘧啶碱和磷酸组成的——在提取的 RNA 中加1.5mol/L硫酸煮沸5min即可得到这些组份的混合溶液 ($) —— 可对它们分别进行定性鉴定，以证明提取物是否为核酸。 四、实验操 作流程 取酵母粉7.5g于100ml锥形瓶中 沉淀 上清液 上清液 沉淀 5 ml 95%乙醇洗涤 10 ml乙醚洗涤后 转移沉淀至布氏漏斗中抽滤 沉淀在空气中自然干燥 RNA粗制品 取200mg，加1.5mol/L硫酸溶液10mL 沸水浴加热5 min，得到水解液（$） 组分鉴定 加入0.04 mol/L NaOH 溶液 45 ml ，摇匀 沸水浴加热30min（时常搅拌），冷却 离心（3000r/min）15 min 倾入25ml酸性乙醇溶液中（边搅拌边缓缓倾入），离心（3000r/min） 3 min 磷酸与定磷试剂反应呈蓝色 (1ml$ + 1ml定磷试剂→水浴加热) ② 核糖与苔黑酚—FeCl3试剂呈鲜绿色 (1ml$ + 2ml苔黑酚—FeCl3试剂→水浴加热) ③ 嘌呤碱与硝酸银作用产生絮状白色的嘌呤银化合物 (2ml$ + 2ml过量氨水 + 0.1mol/LAgNO3 1ml )。 组分鉴定