基因工程概述
1.什么是基因工程,基因工程的基本流程?
基因工程(Genetic engineering)原称遗传工程。从狭义上讲,基因工程是指将一种或多种生物体(供体)的基因与载体在体外进行拼接重组,然后转入另一种生物体(受体)内,使之按照人们的意愿遗传并表达出新的性状。因此,供体、受体和载体称为基因工程的三大要素。
1.分离目的基因
2.限制酶切目的基因与载体
3.目的基因和载体DNA在体外连接
4.将重组DNA分子转入合适的宿主细胞,进行扩增培养
5.选择、筛选含目的基因的克隆
6.培养、观察目的基因的表达
基因工程的载体和工具酶
1. 基因工程载体必须满足哪些基本条件?
具有对受体细胞的可转移性或亲和性。
具有与特定受体细胞相适应的复制位点或整合位点。
具有多种单一的核酸内切酶识别切割位点。
具有合适的筛选标记。
分子量小,拷贝数多。
具有安全性。
2. 质粒载体有什么特征,有哪些主要类型?
1、自主复制性
2、可扩增性
3、可转移性
4、不相容性
主要类型有1.克隆质粒2.测序质粒3.整合质粒4.穿梭质粒5.探针质粒6.表达质粒
3. 质粒的构建
(1)删除不必要的 DNA 区域,尽量缩小质粒的分子量,以提高外源 DNA 片段的装载量。一般来说,大于20Kb 的质粒很难导入受体细胞,而且极不稳定。
(2)灭活某些质粒的编码基因,如促进质粒在细菌种
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