植物细胞组织培养的基本技术分析.ppt

* * 一、试管苗的特点 1. 试管苗的生态环境 试管苗由于是在无菌、有营养供给、适宜光照和温度近100％的相对湿度环境条件下生长的，因此，在生理、形态等方面都与自然条件生长的正常小苗有着很大的差异。 高温且恒温 高湿 弱光 无菌 * * 2、特点：（与常规苗相比） * * 二、炼苗（驯化） * * 适合于栽种试管苗的基质要具备透气性、保湿性和一定的肥力，容易灭菌处理，并不利于杂菌滋生的特点，一般可选用珍珠岩、蛭石、砂子等。 * * 移栽用基质 河砂 草炭土 腐殖土 容器 * * 河砂 分为粗砂、细砂两种类型。粗砂即平常所说的河砂，细砂即通常所说的面砂。 河砂的特点是排水性强，但保水蓄肥能力较差，一般不单独用来直接栽种试管苗。 * * 草炭土 草炭土是由沉积在沼泽中的植物残骸经过长时间的腐烂所形成 其保水性好，蓄肥能力强，呈中性或微酸性反应，但通常不能单独用来栽种试管苗，宜与河砂等种类相互混合配成盆土而加以使用。 * * 腐殖土 腐殖土是由植物落叶经腐烂所形成。一种是自然形成，一种是人为造成。 腐叶上含有大量的矿质营养、有机物质，它通常不能单独使用。掺有腐殖土的栽培基质有助于植株发根。 * * 容器 栽培容器可用6X 6cm-10Xl0cm的软塑料钵，也可用育苗盘。前者占地大，耗用大量基质，但幼苗不用再移，后者需要二次移苗，但省空间、省基质。 * * 移栽和幼苗的管理 从试管中取出发根的小苗，用自来水洗掉根部粘着的培养基，要全部除去，以防残留培养基滋生杂菌。 用消毒水浸泡灭菌。 栽植时用一个筷子粗的竹签在基质中插一小孔，然后将小苗插入，注意幼苗较嫩，防止弄伤，栽后把苗周围基质压实，栽前基质要浇透水。再将苗移入高湿度的环境中。保证空气湿度达90％以上。 * * 移栽和幼苗的管理 保持小苗的水分供需平衡。在移栽后5-7d内，应给予较高的空气湿度条件。当5-7d后，逐渐降低湿度，减少喷水次数，通风，使小苗适应湿度较小的条件。约15d以后揭去拱棚的薄膜，逐渐减少浇水，促进小苗长得粗壮。 防止菌类滋生。应对基质进行高压灭菌或烘烤灭菌。可以适当使用一定浓度的杀菌剂以便有效地保护幼苗。在移苗时尽量少伤苗。喷水时可加入0．1％的尿素，或用1／2MS大量元素的水溶液作追肥，可加快苗的生长与成活。 一定的温、光条件。试管苗移栽以后要保持一定的温光条件，适宜的生根温度是18-20~C。初期可用较弱的光照，如在小拱棚上加盖遮阳网或报纸等，以防阳光灼伤小苗和增加水分的蒸发。当小植株有了新的生长时，逐渐加强光照，后期可直接利用自然光照。 保持基质适当的通气性。要选择适当的颗粒状基质，保证良好的通气作用。在管理过程中不要浇水过多，过多的水应迅速沥除，以利根系呼吸。 * * * * 五 快速繁殖工作的计划安排 快速繁殖是一项复杂的系统工程 速繁殖是由较高的增殖倍数，较短的增殖周期和周年生产这三个因素组成的，因此，凡是应用于生产的种类都必需满足这三个因素。尤其是第一、二个因素，如果达不到要求，那将还是处于研究、开发阶段的种类。 生产体系效率的高不高，接种工序则影响最大，而且是试管繁殖中最核心的技术。况且目前世界各地都还处于手工操作阶段，短期内不太容易实现自动化。在操作中每个操作工1d最大工作量使用200个培养容器，每个容器接种10株。目前已有许多研究者着手开发实现接种操作的自动化 (机器人接种) 。 植物的快速繁殖也应实行有效的管理办法，以迅速提高其生产效率。比如，按植物类型不同，无菌操作复杂程度不同，分别制定出工作的质量与数量标准，对从事操作的人员给予短期严格训练，挑选优秀的人员固定在岗位上，同时给予有吸引力的报酬。接种环节加速了，其他环节的运转也自然会被带动起来。 * * * * * * 谢谢大家 * 附：专用植物组织培养架制作标准： 金属框架，长1.4米，宽0.45米，层高0.45米，共5层（第一层离地0.20米），合计架高2.4米），每层安装4盏日光灯，1盏黄光灯），每层之间由透明玻璃相隔，每层灯管分别配置一个开关，可手工控制灯管开关，每个组培架配置一个电脑时控开关。 * * * * * 有菌的范畴是：凡是暴露在空气中的物体，接触自然水源的物体，至少它的表面都是有菌的。 无菌的范畴是：经高温灼烧或一定时间蒸煮过后的物体，经其他物理的或化学的灭菌方法处理后的物体(当然这些方法必须已经证明是有效的)，高层大气、岩石内部、健康的动、植物的不与外部接触的组织内部，强酸强碱，化学元素灭菌剂等表面和内部等等都是无菌的。 * * * * 外植体消毒程序： * * * * 接种前的准备工作： * * 接种时的无菌操作技术： * * * * * * * * * * 胚状体（embryoid） 定义：离体培养条件下，没有经过受精过程，但是经过