微生物限度检查若干问题..docVIP

微生物限度检查若干问题微生物限度检查若干问题　　微生物限度检查是对非规定灭菌制剂及其原、辅料受到微生物污染程度的一种检查方法，是药品微生物学检验的重要内容之一。中国药典2000年版二部附录J“微生物限度检查法”、《中国药品检验标准操作规范》（2000年版）及参考书《药品微生物学检验手册》均做了详尽的阐述。下面对几个比较重要的问题，谈一点工作学习体会，仅供参考。　　一、实验室要求　　开展微生物限度检查工作，首先要按照《药品检验所实验室质量管理规范》及《药品生产质量管理规范》的要求，建立一个布局合理，使用方便，操作安全的实验室，并且配有完善的实验设施和管理制度。微生物限度检查、无菌检查、抗生素微生物检定实验室以及接种室（接种对照菌及菌种传代）均应严格分开。　　（一）无菌室：　　1结构与要求：　　最好设在二楼以上（防潮、防霉、采光好），面积不超过10平方米，高度不超过24米，由2个缓冲间和操作间组成。缓冲间与操作间之间应有样品传递窗，出入操作间和缓冲间的门不应直对。无菌室内应六面光滑平整，能耐受清洗消毒，墙壁与地面、墙壁与天花板连接处应呈凹弧形，无缝隙、无死角。　　无菌室内光照应不低于300勒克斯，缓冲间和操作间均应装有紫外线杀菌灯2-25w/m3作空气消毒用。紫外线波长200-300nm者具有杀菌作用，其中以265-266nm最强，这与DNA的吸收光谱范围一致。其杀菌机理可能是在DNA中引起胸腺嘧啶双聚体形成，从而干扰DNA复制，导致细菌变异或死亡。紫外线杀菌灯1m以内距离杀菌效果最佳每次开灯照射时间为20min。其缺点：穿透力弱，一张纸可以挡住，不能穿透固体物，对人的皮肤眼睛有损伤，所以紫外线灯开关应装在无菌室外便于开关。　　2温度、湿度：温度应控制在18-26相对湿度40-60操作间或净化工作台的洁净空气应保持对环境形成正比不低于49Pa。　　3操作间：应安装空气除菌过滤层流装置，操作间不应安装下水道，洁净度不低于1万级，净化工作台局部应为100级。操作间应准备电子称（感量01g最大称量300g乙醇灯火柴2碘酊及75乙醇棉球，大、小橡皮乳头，记号笔，灭菌的剪刀，镊子、注射器等。　　4缓冲间：应有洗手盒、消毒液、无菌衣、帽、口罩，拖鞋等，不应放置培养箱和其他杂物。　　（二）洁净级别及检查方法：　　通常采用尘粒数及浮游菌数或沉降菌数测定法。　　98年国家药监局颁布药品生产质量管理规范把药品生产洁净区空气洁净度划分为四个级别：　　空气洁净度级别表　────────────────────────────尘埃数/立方米活微生物数个洁净级别─────────────────────≥05μm≥5μm浮游菌/立方米沉降菌/皿────────────────────────────100级≤3500≤0≤5≤11万级≤35万≤2000≤100≤310万级≤350万≤2万≤500≤10────────────────────────────　　尘埃数：用尘埃粒子计数器测定，取样高度离地面1米，间距05-2米每个测试点连续采样3-5次，仪器显示结果。　　沉降菌数测定：无菌室及净化工作台面消毒擦拭后，先启动层流净化装置30min，将营养琼脂平板3个及改良马丁琼脂平板3个直径9cm，置净化台左、中、右各1个开盖，暴露30min后将盖盖上。分别在30-35培养48h及25-28培养72h细菌和真菌总数不超过1个为100级。　　无菌室应在每次操作前后均用01苯扎溴铵溶液或其他消毒液擦拭台面及紫外线照射不到可能污染的死角；用消毒液湿拖地面。实验室一旦被污染洁净度达不到要求可以清洗或更换净化工作台过滤器甲醛或丙二醇乳酸熏蒸消毒方法：支架上放一个烧杯（内装少许甲醛，8ml/平方米下面放一个装有少许乙醇的乙醇灯点燃后，关闭门窗，乙醇用尽后灯自灭，甲醛蒸气充满无菌室，密闭24h。　　缺点：甲醛蒸气易锈蚀仪器，对人有刺激，可用氨水中和，减少对人眼的刺激。　　二、无菌操作　　指在无菌的环境条件下，使用无菌的器材，防止微生物污染的操作技术。从事微生物检验的工作人员必须经过无菌技术及基础微生物学专业知识培训，才具备上岗操作的资格。所用的物品需清洗、干燥、包扎，无菌。　　干烤箱1602h适用于培养皿9cm、试管、吸管、锥形管、剪刀、镊子物品的灭菌；培养基及09氯化钠溶液用高压锅湿热灭菌含糖培养基一般用11330min以防温度过高成分被破坏；一般培养基11530min;09氯化钠溶液可用12120min即可。　　操作者在缓冲间换拖鞋，用肥皂洗手后，穿戴无菌工作服、帽、口罩，操作前用01苯扎溴铵泡手75乙醇棉球擦拭双手后在乙醇灯火焰区操作。操作中切勿用嘴直接吸吹吸管防止致病菌感染操作人员及口中的杂菌污染供试品。