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* 1、研究微生物,利用微生物,需要培养微生物。我们怎样培养微生物?培养微生物,需要提供哪些物质? 2、各种微生物的代谢类型不同,生长过程所需要的物质是不同的。怎样根据微生物代谢方式的差异选择培养基中的物质? 碳源 氮源 生长因子 无机盐 水 微生物需要的五大类营养要素物质 (一)微生物需要的营养物质及功能 ①、目的要明确 根据所培养的微生物的种类、培养的目的配制 ②、营养要协调 注意各种营养物质的浓度和比例,最重要为碳源和氮源的比,如: 谷氨酸生产中 C:N=4:1,菌体数↑谷氨酸↓。 C:N=3:1,菌体数↓谷氨酸↑。 ③、pH要适宜 细菌 pH6.5~7.5 放线菌 pH7.5~8.5 真菌 pH5.0~6.0 (二)培养基的配制原则 根据物理性质分 固体培养基——用于微生物的分离计数 半固体培养基——观察微生物的运动,鉴定菌种 液体培养基——常用于工业生产 根据化学成分分 合成培养基——成分明确,常用于分类,鉴定 天然培养基——成分不明确,常用于工业生产 (三)培养基的种类 根据用途分 选择培养基——在培养基中加入某种化学物质,以抑制不需要的微生物的生长,促进所需要的微生物的生长,如 加高浓度的食盐,抑制多种细菌生长,分离到金黄色葡萄球菌 鉴别培养基——在培养基中加入某种指示剂或化学药品,用以鉴别不同种类的微生物,如 伊红和美蓝,能与大肠杆菌的代谢产物(有机酸)结合,使菌落呈深紫色,并带有金属光泽,可以用来鉴别大肠杆菌 常用的选择培养基 加入青霉素的培养基 分离酵母菌、霉菌等真菌 加入高浓度食盐的培养基 分离金黄色葡萄球菌 不加氮源的无氮培养基 分离固氮菌 不加含碳有机物的无碳培养基 分离自养型微生物 加入青霉素等抗生素的培养基 分离导入了目的基因的受体细胞 微生物的分离:科赫的稀释—划线分离培养法 19世纪后期,德国细菌学家科赫发明了固体培养基,将微生物样品稀释后,用针尖沾取少量的稀释菌液在固体培养基上划线,不久培养基的表面就会长出多种菌落。 科赫推断相同特征的菌落来自同一个种,于是,就挑选某一种菌落的微生物,经过几次相同的培养过程后,就得到了纯种。 应用固体培养基,科赫分离出了炭疽芽孢杆菌、霍乱弧菌、结核杆菌等。1905年,科赫因结核杆菌的研究成果而获诺贝尔生理学及医学奖。 细菌学家科赫 用稀释划线法获得的不同细菌的菌落 若硝化细菌、圆褐固氮菌、不固氮的蓝藻混合在一起,根据所学的知识我们配置什么样的培养基可以将三种微生物分离? 光 铵盐、硝酸盐 CO2 不固氮的蓝藻 有机物 N2 糖类等含碳有机物 圆褐固氮菌 氨 氨 CO2 硝化细菌 能源 氮源 碳源 思考? 固体培养基 半固体培养基 液体培养基 主要用于微生物的分离、计数等 主要用于观察微生物的运动、鉴定菌种等 主要用于工业生产 需加入凝固剂,如琼脂 碳源 作用 来源 概念 凡是能为微生物提供所需碳元素的营养物质 无机碳源 CO2 NaHCO3等 有机碳源 糖类 脂肪酸 花生粉饼 石油 等 ①构成细胞物质和一些代谢产物 ②异养微生物的能源 1、微生物的碳源 自养型和异养型微生物分别能利用哪类碳源物质? 思考 大多数已知细菌和全部真核微生物 有机物 有机物 有机物 化能异养型 硝化细菌 硫细菌 铁细菌 二氧化碳 无机物 无机物 化能自养型 红螺菌 紫色 非硫细菌 二氧化碳及简单有机物 有机物 光 光能异养型 蓝藻 红硫细菌 衣藻 二氧化碳 无机物 光 光能自养型 微生物举例 基本碳源 氢的供体 能源 营养类型 微生物的营养类型 氮源 作用 来源 概念 无机氮源 N2、NH4+、 NO3-、NH3等 有机氮源 尿素、牛肉膏、 蛋白胨、氨基酸 等 凡是能够为微生物提供N元素的营养物质 主要用于合成蛋白质、核酸 及含N的代谢产物 2、微生物的氮源 哪些微生物能够利用分子态氮?氮源能否为微生物提供能量? 思考 概念 成分 作用 为什么不可缺少? 常见的生长因子 微生物生长不可缺少的微量有机物 有机物 酶和核酸的组成成分 缺乏合成这些物质所需酶或合成能力有限 维生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶等 3、生长因子 设计一个实验证明胱氨酸是肠膜状乳杆菌所需的生长因子。 * * *
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