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二、实 验 设 计 三、操作提示 * (一)纤维素与纤维素酶 1、纤维素 纤维素是一种由葡萄糖首尾相连而成的高分子化合物,是含量最丰富的多糖类物质。 一、基础知识 植物的根、茎、叶等器官都含有大量的纤维素。其中棉花是自然界中纤维素含量最高的天然产物。植物每年产生的纤维素超过70亿吨,其中40%-60%能被土壤中能产生纤维素酶的微生物所利用。 人类可应用分解纤维素的微生物将秸秆等废弃物生产酒精,用纤维素酶处理服装面料等。 2、纤维素酶 纤维素酶是一种复合酶,一般认为它至少包括三种组分,即C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶,前两种酶使纤维素分解成纤维二糖,第三种酶将纤维二糖分解成葡萄糖。 纤维二糖 C1酶、Cx酶 葡萄糖苷酶 葡萄糖 纤维素 ①取二支20mL的试管 实验:纤维素酶分解纤维素 ②各加入一张滤纸条 ③各加入pH4.8,物质量为0.1mol/L的醋酸-醋酸钠缓冲液11ml和10ml 甲 乙 ④在乙试管中加入1mL纤维素酶 ⑤两支试管固定在锥形瓶中,放在 140r/min的摇床上振荡1h 结果:乙试管的滤纸条消失 讨论:乙试管的滤纸条为什么会消失?甲试管的作用是什么? (二)纤维素分解菌的筛选 -----刚果红染色法 刚果红能与纤维素形成红色复合物,而不与水解后的纤维二糖和葡萄糖发生这种反应。 当我们在含有纤维素的培养基中加入刚果红时,刚果红能与培养基中的纤维素形成红色复合物。当纤维素被纤维素酶分解后,刚果红-纤维素的复合物就无法形成,培养基中就会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈,这样我们就可以通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。 土壤取样 选择培养 梯度稀释 将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上 挑选产生透明圈的菌落 1、土壤取样 选择纤维素丰富的环境,如树林中多年落叶形成的腐殖土,多年积累的枯枝败叶等等。如果找不到合适的环境,可以将富含纤维素的物质,如滤纸等,埋在土壤中一个月左右,再从已腐烂的滤纸上筛选。 2、选择培养 增加纤维素分解菌的浓度,以确保能够从样品中分离所需要的微生物。 3、梯度稀释 4、将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上 方法一:先培养微生物,再加入刚果红进行颜色反应。 方法二:在倒平板时就加入刚果红。 这两种方法各有哪些优点与不足? 方法二 方法一 缺点 优点 染色法 颜色反应基本上是纤维素分解菌的作用 操作繁琐,刚果红会使菌落之间发生混杂。 操作简便不存在菌落混杂问题 1、产生淀粉酶的微生物也产生模糊透明圈。 2、有些微生物能降解色素,形成明显的透明圈。 5、挑选产生透明圈的菌落 挑取产生明显的透明圈的菌落,一般即为分解纤维素的菌落。 接种到纤维素分解菌的选择培养基上,在300C-370C培养,可获得纯培养。 四、结果分析与评价 五、课题延伸 例1;有些细菌可分解原油,从而消除由原油泄漏造成的土壤污染。某同学欲从受原油污染的土壤中筛选出能高效降解原油的菌株。回答问题: (1)在筛选过程中,应将土壤样品稀释液接种于以 为唯一碳源的固体培养基土,从功能上讲,该培养基属于 培养基。 (2)纯化菌种时,为了得到单菌落,常采用的接种方法有两种,即 和 。 (3)为了筛选出高效菌株,可比较单菌落周围分解圈的大小,分解圈说明该菌株的降解能力 。 (4)通常情况下,在微生物培养过程中实验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌、 和 。无菌技术要求试验操作应在酒精灯 附近进行,以避免周围环境中微生物的污染。 原油 选择 平板划线法 稀释涂布平板法 强 干热灭菌 高压蒸汽灭菌 火焰 *
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