基因表达量实时荧光定量PCR检测步骤..docxVIP

基因表达量实时荧光定量PCR检测步骤1 材料（试剂和耗材）1.1 样本（小鼠组织）-2个1.2 引物（life technology公司合成）1.3 BestarTMqPCR RT Kit（德国DBI货号：DBI-2220）1.4 Bestar? SybrGreenqPCRmastermix（德国DBI货号：DBI-2043）1.5 96孔板（美国life technology）2 材料（仪器）2.1 ABI7500荧光定量PCR仪（life technology公司）2.2 TGL-16M低温冷冻离心机（湘仪）2.3 SW-CJ-1D单人净化工作台（泸净净化）2.4 HR40-Ⅱ A2生物安全柜（Haier）3 实验步骤3.1 RNA的抽提RNA 的提取按life technology公司提供的Triozol RNA提取试剂盒的使用说明进行。程序如下：（1）将组织在液氮中磨碎，每50-100mg组织加入1ml TRIzol；（2）加入0.2mL氯仿，盖紧离心管管盖，上下颠倒混匀60s（请勿涡漩激烈振荡），室温静置3min，12,000g，4℃离心 15min，置于冰上；（3）溶液分为三层，RNA溶解在水相中，小心吸取 500μl水相至另一个新的RNase free的EP管中；（4）加入500μl异丙醇，-20度放置1h，12,000g，4℃离心10min，