血液样本采集和血涂片制备综述.doc

血液样本采集和血涂片制备 抽血时针栓只能外抽，不能内推，以免静脉内注入空气形成气栓，造成严重后果。 属于酸性染料的是：伊红属于酸性染料，通常为钠盐，有色部分为阴离子。 疟原虫检查常用的染色方法是 ：吉姆萨染液对细胞核、寄生虫（如疟原虫等）找色较好，结构更清晰，但对细胞质的着色能力略差。 手工推片法，推片与载玻片的夹角为25°～30°。 血液黏度与血细胞比容和血浆黏度有关，其中，血浆黏度受血浆中纤维蛋白原、球蛋白等大分子蛋白质的影响，它们的浓度越高，血浆黏度越高。 涂片瑞氏染色时，缓冲液常用的pH为6.4～6.8。 瑞氏染料是由酸性染料伊红和碱性染料亚甲蓝（又名美蓝）组成。染色原理既有物理的吸附作用，又有化学的亲和作用。血红蛋白、嗜酸性颗粒为碱性蛋白质，与酸性染伊红结合，染粉红色；细胞核蛋白、淋巴细胞、嗜碱性粒细胞胞质为酸性，与碱性染料亚甲蓝或天青结合，染紫蓝色或蓝色；中性颗粒呈等电状态与伊红和亚甲蓝均可结合，染淡紫红色；原始红细胞、早幼红细胞胞质、核仁含较多酸性物质，染成较浓厚的蓝色；中幼红细胞既含酸性物质，又含碱性物质，染成红蓝色或灰红色；完全成熟红细胞，酸性物质彻底消失后，染成粉红色。瑞氏染色法是最经典、最常用染色法。 瑞氏染料亚甲蓝容易氧化为一二三甲基硫堇等次级染料（即天青）。将适量伊红、亚甲蓝溶解在甲醇中，即为瑞氏染料，由酸性染料伊红（E－）和碱性染料亚甲蓝（M＋）组成。Ⅱ液磷酸盐缓冲液pH为6.4～6.8。在偏碱性环境中负电荷增多，易与亚甲蓝结合，所有细胞呈灰蓝色，颗粒呈深暗，嗜酸 颗粒呈暗褐，甚至棕黑色，中性颗粒偏粗，呈紫黑色。 9、细胞各种成分均属蛋白质，由于蛋白质系两性电解质，所带电荷随溶液pH而定，在偏酸环境中正电荷增多易与伊红结合染色偏红；在偏碱环境中负电荷增多易与亚甲蓝或天青结合偏蓝。因此，细胞染色对氢离子浓度十分敏感，所以在瑞氏染色中缓冲液起到恒定pH作用。 10、 染色原理：既有物理的吸附作用，又有化学的亲和作用。各种细胞成分化学性质不同，对各种染料的亲和力也不一样。 11、血清与血浆的差别是：血清中缺少某些凝血因子，如凝血因子Ⅰ（纤维蛋白原）、凝血因子Ⅱ（凝血酶原）、凝血因子Ⅴ、凝血因子Ⅷ等。 12、正常成人血量约为（70±10ml）/kg体重，成人4～5L，占体重的6%～8%，其中血浆占55%，血细胞占45%。 13、全血由血细胞和血浆组成；血浆为全血除去血细胞部分，除钙离子外，含有其他全部凝血因子；血清是离体后的血液自然凝固后析出的液体部分，除纤维蛋白原等凝血因子在凝血时消耗外，其他成分与血浆基本相同。 14、涂片瑞氏染色时，缓冲液常用的pH为6.4～6.8。 15、很多因素影响血涂片时血膜的厚度，血滴大、血黏度高、推片角度大、速度快则血膜厚，反之则血膜薄。 16、引起血涂片分布不均的主要原因有：推片边缘不整齐，用力不均匀，载片不清洁。 17、疟原虫、微丝蚴检查，采用厚血膜涂片法。 18、红细胞沉降率测定时，抗凝剂与血液的比例为1：4。 19、肝素能加强凝血酶Ⅲ灭活丝氨酸蛋白酶，从而阻止凝血酶形成。过量肝素可引起白细胞聚集合血小板减少，均不适合白细胞分类和血小板计数，更不适用于止血学检验，但是红细胞渗透脆性试验的理想抗凝剂。每毫升血液的肝素用量为10.0～12.5IU，多为肝素钠盐或钾盐 20、血液由血细胞和血浆组成，将抗凝的全血离心后除去血细胞成分即为血浆。 21、双草酸盐抗凝剂可用于血细胞比容、CBC、网织红细胞计数等项目检查，但其可使血小板聚集，影响白细胞形态，不适用于血小板计数、白细胞分类计数。 22、枸橼酸盐：常用有枸橼酸钠，能与血液中钙离子结合形成螯合物，阻止血液凝固。 23、肝素：加强抗凝血酶（AT）灭活丝氨酸蛋白酶作用，阻止凝血酶的形成，并阻止血小板聚集等作用，从而阻止血液凝固。 24、血液常规分析所用的抗凝剂 ：EDTA-K2。临床上常用的抗凝剂有：①枸橼酸盐，可与钙离子形成可溶性螯合物，从而阻止血液凝固，常用于凝血象和红细胞沉降率的测定；②草酸盐，可与钙离子生成草酸钙沉淀，从而阻止血液凝固，常用于凝血象检查；③双草抗凝剂，适用于血细胞比容、血细胞计数、网织红细胞计数等检查，不适用于血小板计数和白细胞分类计数；④肝素，是红细胞渗透脆性试验的理想抗凝剂，但不适用于细胞形态学检查和全血细胞计数；⑤乙二胺四乙酸EDTA盐，可与钙离子形成螯合物，使钙离子失去凝血作用，阻止血液凝固，适用于全血细胞计数，不适用于凝血检查、血小板功能试验。 24、EDTA抗凝剂对血细胞形态、血小板计数影响很小，适用于血液学检查，尤其是血小板计数。 25、纤维蛋白原国际命名为凝血因子Ⅰ，是血浆的成分之一。 26、抗凝血标本采集后保存的最佳温度为4℃左右，通常室温（22℃左右）放置的