实验8萘联苯的高效液相色谱分析..docVIP

实验8 萘联苯的高效液相色谱分析 实验目的 理解反相色谱的优点及应用。 掌握归一化定量方法。 实验原理 在液相色谱中，若采用非极性固定相和极性流动相，称为反相色谱法。这种方法特别适合于同系物、苯并系物等的分离分析。萘、联苯、菲在ODS柱上的作用力大小不等，则值（为不同组分的分配比）不等，在柱内的移动速率不同，因而先后流出柱子。根据组分面积大小及测得的定量校正因子，就可由归一化定量方法求出各组分的含量。归一化定量公式为 式中，为组分的峰面积；为组分的相对定量校正因子。（以萘为标准，=1）采用归一化法的条件是样品中所有组分都要流出色谱柱，并能给出信号。此法简便、准确，对进样量的要求并不十分严格。 仪器与试剂 仪器：LC-10A高效液相色谱仪；紫外吸收检测器（254nm）；柱Econosphere (3微米)，10cm×4.6cm；微量注射器。 试剂：甲醇，重蒸馏一次；二次蒸馏水；萘、联苯、菲均为分析纯；流动相：甲醇/水=88/12 实验步骤 按操作说明书使色谱仪正常运行，并将实验条件调节如下：柱温为室温；流动相流量为1.0mL/min；检测器工作波长为254nm。 得到标准溶液，已由老师配制。（标准溶液配制：准确称取萘0.08g、联苯0.02g，用重蒸馏的甲醇溶解，并转移至20mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度） 在基线平直后，注入标准溶液3.0微升，记下各组分保留时间。再分别注入纯样对照。 注入样品3.0微升，记下保留时间。重复两次。 实验结束后，按要求关闭仪器。 结果处理 数据记录： 样品 出峰时间/min 峰面积 萘标准液 3.640 1090672.7 联苯标准液 4.340 839181.6 混合液 3.632 1003822.0 4.340 108847.5 确定未知样中各组分的出峰顺序 答：混合样中，根据混合液里两混合样的出峰时间与萘及联苯标准液出峰时间的对比得出，萘比联苯先出峰。 计算各组分的相对定量校正因子( ) 组分 萘 联苯 相对定量校正因子 1.00 0.325 （3）计算样品中各组分的百分含量 组分 萘/％ 联苯/％ 百分含量 96.6 4.40 六 注意事项 用微量注射器吸液时，要防止气泡吸入。首先将擦干净并用样品吸洗过的注射器插入样品液面后，反复提拉数次，驱除气泡，然后缓慢提升针芯至刻度。 进样与按下计时按键要同步，否则影响保留值的准确性。 室温较低时，为加速萘的溶解，可用红外灯稍加热。 七 思考题 观察分离所得的色谱图，解释不同组分之间分离差别的原因。 答： 反相色谱法特别适合于同系物、苯并系物等的分离分析。 萘、联苯、菲在ODS柱上的作用力大小不等，则值不等，在柱内的移动速率不同，因而先后流出柱子。 高效液相色谱柱一般可在室温下进行分离，而气相色谱柱则必须恒温，为什么？高效液相色谱柱有时也实行恒温，这又为什么？ 答： 气相温度对于样品的气化程度影响很大，一般说温度越高，汽化越快，通过色谱柱时间也越短，气相单一物质分析一般用恒温，多种物质分析时，通过改变柱温能够很好地对样品进行分离，节省了分析时间，这时往往用梯度升温。液相并不都是室温，一般来说，温度对于反相色谱分析影响不大，所以用反相柱分析时，一般用室温，不配备柱温箱，但是很多正相色谱分析时对于温度要求比较严格没有柱温箱是不能分析的。 说明紫外吸收检测器的工作原理。 答： 紫外吸收检测器的工作原理是Lambert-Beer定律，即当一束单色光透过流动池时，若流动相不吸收光，则吸收度A与吸光组分的浓度C和流动池的光径长度L成正比。物理上测的物质的透光率，然后取负对数得到吸收度。大部分常见有机物质和部分无机物质都具有紫外或可见吸收基团，因而UVD既有较高的灵敏度，也有很广泛的应用范围，是液相色谱中应用最广泛的检测器。  1