实验九染色体核型分析..docVIP

实验染色体核型分析 【实验目的】 1. 观察测量照片上每条染色体，进行配对排列和剪贴成核型分析图 2. 掌握染色体组型分析的各种数据指标，学习和掌握核型分析的方法【实验原理】 核型(Karyotype)亦称染色体组型，是指体细胞有丝分裂中期细胞核(或染色体组)的表型，是染色体数目、大小、形态特征的总和。每一个体细胞含有两组同样的染色体，用2n表示。其中与性别直接有关的染色体，即性染色体，可以不成对。每一个配子带有一组染色体，叫做单倍体，用n表示。两性配子结合后，具有两组染色体，成为二倍体的体细胞。在对染色体进行测量计算的基础上，进行分组、排队、配对，并进行形态分析的过程叫核型分析(如图1所示)。将一个染色体组的全部染色体逐条按其长短、形态、类型等特征排列起来的图称为核型图，它代表一个物种的核型模式。核型分析通常包括两方面的内容：⑴ 确定一物种的染色体数目；⑵ 辨析每条染色体的特征。 (2n=46) 染色体在复制以后，纵向并列的两个染色单体，通过着丝粒联结在一起。着丝粒在染色体上的位置是固定的。由于着丝粒位置的不同，染色体可分成相等或不相等的两臂，造成中着丝粒，亚中着丝粒、亚端部着丝粒和端部着丝粒等形态不同的染色体。此外，有的染色体还含有随体或次级缢痕所有这些染色体的特异性构成一个物种的。细胞分裂中期是染色体的形态结构最典型的时期，通过显微镜摄影，将选取伸展良好，形态清晰，有代表性的细胞分裂相进行高倍拍摄放大，得到用于核型分析的照片。 图2 中期染色体形态及结构 1. 分析标准：⑴ 臂比值r(长臂长/短臂长)⑵ 着丝粒指数i[(短臂长/染色体长)×100%]⑶ 相对长度：某条染色体长度占一套单倍体染色体长度总和的百分比：相对长度(%)＝(某染色体长度/单套染色体组总长)×100％(植物)；或：相对长度(%)＝[某染色体长度/(单套常染色体+X染色体)的总长]×100％(动物)⑷ 臂比臂臂臂⑸ 染色体长度比：根据染色体长度比[(最长染色体长/染色体长)×100%]表：着丝粒位置的确定(Levan 1964年的标准)臂比 着丝粒指数 着丝粒位置 简写 1.0 1.01～1.7 1.71～3.0 3.01～7.0 大于7.0 ∞ 50.0 50.0～37.5 37.5～25.0 25.0～12.5 12.5～0.0 0 正中部着丝粒 中部着丝粒 亚中部着丝粒 亚端部着丝粒 端部着丝粒 正端部着丝粒 M m sm st t T Stebbins根据核型中染色体的长度比和臂比两项特征，区分核型的对称与不对称程度，将其分为12种类型(表2)。 表：(Stebbins) 最长/最短 臂比大于＞4∶1的染色体的百分比 0.0 0.01~0.5 0.51~0.99 1.0 ＜2∶1 2∶1～∶1 ＞4∶1 1A 1B 1C 1A 1B 1C 1A 1B 1C 1A 1B 1C 注：A为对称核型，B为中间类型，C为较不对称核型。 3. 实践应用：核型分析可以探明生物遗传与变异、染色体组演化和种属间亲缘关系等，同时染色体显带也表明不同个体及物种的染色体显带核型均有化，这种现象称染色体多态性(Chromosome Heteromorphism)，因此核型分析在遗传学研究特别是与人类染色体疾病的临床诊断方面有着重要的应用。 【实验材料】 【实验准备】 放大、尺、剪刀、镊子、计算器、座标纸、绘图纸、胶水。 【实验步骤】 . 染色体数目统计：观察统计时原则上要观察尽可能多的个体约100个细胞为宜，使其具有较高的准确性和代表性。 2. 准备染色体标本的相片：将制的细胞轮廓清楚，染色体集中而不重叠，、次缢痕和随体清晰，染色体长度适中而不弯曲的不扭曲、不断裂的5个以上染色体标本，通过显微镜与数码相机或电脑的数据接口，形成并储存成图片格式，最终打印成相片。 . 染色体测量：确定染色体数目，目测相片上每条染色体长度，按长短顺序初步编号，写在相片每条染色体背面，用钢尺逐个测量每条染色体长度[长臂(q)长、短臂(p)长]，根据相片计算出各条染色体的相对长度、臂比值及着丝粒位置，有随体的染色体，其随体长度和次缢痕长度可计入全长，也可不计入，但必须加以说明。将测量的数据记录于表。表核型分析实测记录表 序号 (条) 实测长度mm) 序号 (条) 实测长度mm) 长臂 短臂 长臂 短臂 1 2 3 5 6 … 4. 染色体的计算：将计算的数据记录于表。 表核型分析计算表 序号(对) 相对长度(%) 臂比 染色体类型 1 2 3 总 和 . 核型图：排分组： 按染色体由长到短重新编号，由左向右顺序贴在纸上； 着丝点排列在同一水平线上，短臂在上，长臂在下； 着丝粒类型相同，相对长度相近的分一组； 同一组的按染色体长短顺