食品中乳酸菌的检测题库.pptVIP

食品中乳酸菌的检测 1.1 乳酸菌 lactic acid bacteria 一类可发酵糖主要产生大量乳酸的细菌的通称。本标准中乳酸菌主要为 乳杆菌属（Lactobacillus） 、 双歧杆菌属（Bifidobacterium） 链球菌属（Streptococcus） 。 5培养基和试剂 5.1 MRS（Man Rogosa Sharpe）培养基及莫匹罗星锂盐（Li-Mupirocin）改良 MRS培养基：见附录 A 中 A.1。 5.2 MC 培养基（Modified Chalmers 培养基）：见附录 A中 A.2。 5.3 0.5 %蔗糖发酵管：见附录 A中 A.3。 5.4 0.5 %纤维二糖发酵管：见附录 A中 A.3。 5.5 0.5 %麦芽糖发酵管：见附录 A中 A.3。 5.6 0.5 %甘露醇发酵管：见附录 A中 A.3。 5.7 0.5 %水杨苷发酵管：见附录A中A.3。 5.8 0.5 %山梨醇发酵管：见附录A中A.3。 5.9 0.5 %乳糖发酵管：见附录A中A.3。 5.10 七叶苷发酵管：见附录A中A.4。 5.11 革兰氏染色液：见附录A中A.5。 5.12 莫匹罗星锂盐（Li-Mupirocin）：化学纯。 实验器具 实验原理 7 操作步骤 7.1 样品制备 7.1.1 样品的全部制备过程均应遵循无菌操作程序。 7.1.2 冷冻样品可先使其在 2 ℃～5 ℃条件下解冻，时间不超过 18 h，也可在温度不超过 45 ℃的条件解冻，时间不超过 15 min. 7.1.3 固体和半固体食品：以无菌操作称取 25 g 样品，置于装有 225 mL 生理盐水的无菌均质杯内，于 8000 r/min～10000 r/min均质1 min～2 min，制成 1:10 样品匀液；或置于 225 mL 生理盐水的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打 1 min～2 min 制成 1:10 的样品匀液。 7.1.4 液体样品：液体样品应先将其充分摇匀后以无菌吸管吸取样品 25 mL 放入装有 225 mL 生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分振摇，制成 1:10 的样品匀液。 。 实验原理 实验原理 7.2.3 乳酸菌计数 7.2.3.1 乳酸菌总数 根据待检样品活菌总数的估计，选择 2 个～3 个连续的适宜稀释度，每个稀释度吸取 0.1 mL 样品匀液分别置于 2 个MRS琼脂平板，使用 L 形棒进行表面涂布。36 ±1 ℃℃，厌氧培养 48 h±2 h后计数平板上的所有菌落数。从样品稀释到平板涂布要求在 15min 内完成。 7.2.3.2 双歧杆菌计数 根据对待检样品双歧杆菌含量的估计，选择 2 个～3 个连续的适宜稀释度，每个稀释度吸取 0.1 mL样品匀液于莫匹罗星锂盐（Li-Mupirocin）改良 MRS 琼脂平板，使用灭菌 L 形棒进行表面涂布，每个稀释度作两个平板。36 ±1 ℃℃，厌氧培养 48 h±2 h 后计数平板上的所有菌落数。从样品稀释到平板涂布要求在 15 min 内完成。 7.2.3.3 嗜热链球菌计数 根据待检样品嗜热链球菌活菌数的估计， 选择2个～3个连续的适宜稀释度， 每个稀释度吸取0.1 mL样品匀液分别置于 2 个MC 琼脂平板，使用 L 形棒进行表面涂布。36 ±1 ℃℃，需氧培养 48 h±2 h后计数。 嗜热链球菌在MC琼脂平板上的菌落特征为： 菌落中等偏小， 边缘整齐光滑的红色菌落， 直径2 mm±1 mm，菌落背面为粉红色。从样品稀释到平板涂布要求在 15 min 内完成。 7.2.3.4 乳杆菌计数 7.2.3.1 项乳酸菌总数结果减去7.2.3.2 项双歧杆菌与7.2.3.3 项嗜热链球菌计数结果之和即得乳杆菌计数。 实验原理 注意倒培养基时要适量，避免因培养基不够影响实验。 稀释转移好后要震荡均匀。 从样品稀释到平板涂布要求在15min内完成。 注意1mL移液管的使用,不要交叉污染。 菌落计数、结果表述和报告 参见项目四：菌落总数的测定第一法。 参见GB 478935-2010。 9 乳酸菌的鉴定（可选做） 9.1 纯培养 挑取 3 个或以上单个菌落，嗜热链球菌接种于 MC 琼脂平板，乳杆菌属接种于 MRS琼脂平板，置 36 ℃±1 ℃厌氧培养 48 h。 9.2 鉴定 9.2.1 双歧杆菌的鉴定按 GB/T 4789.34 的规定操作。 9.2.2 涂片镜检：乳杆菌属菌体形态多样，呈长杆状、弯曲杆状或短杆状。无芽胞，革兰氏染色阳性。 嗜热链球菌菌体呈球形或球杆状