微波辅助衍生化在药物中的应用讲义.pptVIP

02 操作特色 操作过程简单 容易实现自动化 · 有商业化的微波加热装置 · · · 环境热损耗低 · 减少由于电热板、空气、容器壁的热传导和热辐射造成的热量损失 加快反应速率 缩短样品前处理时间题 ·处理所需时间从60min缩短到5min以内 选择性加热 · 对物质进行直接加热 Efficient Simple Rapid Sensitive 科研应用 03 3 科研应用 · · · Chinese Journal of Pharmaceuticals 2011,42(5) 2010年 普瑞巴林中(R)-对映体的微波辅助柱前衍生化-HPLC法测定 李 硕, 刘 浩, 林 梅, 杜狄峰. * Mircrowave-assited Derivatization 药理药效 通用名称：普瑞巴林 商品名称：乐瑞卡、莱瑞克 剂型：片剂、胶囊 药理药效：普瑞巴林是一种新型钙离子通道调节剂（非γ-氨基丁酸(GABA)受体激动剂或拮抗剂），能阻断电压依赖性钙通道，减少神经递质的释放。 * Mircrowave-assited Derivatization 分子式：C8H17NO2 分子量：159.23 物化性质： 白色结晶性粉末 熔点 (℃)：184 - 186 用途：该药是在开发的癫痫治疗药中最有希望的一个药物，疗效更好和给药更方便。也可以用于治疗疼痛和焦虑如带状疱疹后遗神经痛。 物化性质 1 优映体 通过抑制中枢神经系统钙通道的α2-δ蛋白来减少Ca2+ 内流，从而减少谷氨酸盐和去甲肾上腺素等兴奋性神经递质的释放。 2 劣映体 (R) - 对映体2的活性只有1的1/10。 普瑞巴林 [pregabalin, γ- 氨基丁酸 (GABA) 受体阻滞剂] * Mircrowave-assited Derivatization S型的紫外吸收很弱，采用手性柱分离、质谱检测的成本高，且分离效果差，进行微量杂质检查时不易测定。 * Mircrowave-assited Derivatization Nα-( 5- 氟 -2,4- 二硝基苯基 ) -L- 丙氨酰胺衍生化法检测 1 对映异构体，但该类衍生化反应通常在 40 ℃水浴中进行，反应时间较长，后处理步骤繁琐，而且所形成的 2 衍生物和 1 衍生物间分离度较小，检测灵敏度和准确性较低，质子性溶剂水中进行，不利于该类亲核取代反应的进行。 本研究选取疏水性较强的Nα-(5-氟-2,4-二硝基苯基 )-D-缬氨酰胺(3)作为柱前衍生化试剂，微波加热以加速反应，在高沸点的非质子性有机溶剂中发生亲核取代反应，形成具有强紫外吸收的衍生物，采用常规的 C18 色谱柱可使 2 衍生物在1 衍生物之前洗脱并被检测，两者分离完全、峰形好，检测灵敏度和准确性较高。 方法对比 * Mircrowave-assited Derivatization 仪器和试剂 Agilent 1100型高效液相色谱仪 普瑞巴林原药 普瑞巴林消旋体 Nα-(5-氟-2,4-二硝基苯基 )-D-缬氨酰胺 * Mircrowave-assited Derivatization 衍生化方法 精密量取对照溶液和供试品溶液各 1 ml，各置聚丙烯瓶中，精密加入衍生化试液 10 ml 和 0.05 mol/L 三乙胺溶液 1 ml，摇匀，用封口膜密封，置微波炉内 600 W 加热衍生化反应 3 min 后，取出，冷却至室温，溶液由亮黄色变为浅红色。精密加入0.05 mol/L 乙酸1 ml终止反应，摇匀，即得。 * Mircrowave-assited Derivatization 色谱条件 色谱柱：Hypersil BDS C18柱(4.6 mm×250 mm，5μm) 流动相 ：0.1 mol/L 甲酸铵溶液(用甲酸调至pH 3.0)-乙腈(49︰51) 检测波长：340nm 流速：1.0 ml/min 柱温：25℃ 进样量： 10μl * Mircrowave-assited Derivatization 系统适用性试验 测定衍生化的消旋体溶液，结果显示 1、2 衍生物的峰形良好 ，分离度为 4.3。理论板数按 1、2 衍生物计均大于 14 000，拖尾因子为 1.06。 以水作为对比溶液，表明衍生化试剂不干扰样品的测定。 * Mircrowave-assited Derivatization 1.线性 配置规定范围内一系列消旋体溶液（溶液Ⅰ～Ⅴ），测得的响应信号与被测物浓度作图，用最小二乘法进行线性回归。得回归方程：A=3.429c+0.8513，r=0.9998。结果显示 2 在 2 ～ 20 μg/ml 浓度范围 ( 相当于 0.1 ％～1.0％ ) 内与其衍生物峰面积线性关系良好。定