抗埃博拉核蛋白人鼠抗体导论.pptVIP

抗埃博拉核蛋白 人鼠嵌合抗体的研究 ---病原生物学文献阅读报告 埃博拉病毒简介: 埃博拉出血热（Ebola Haemorrhagie Fever , EBHF）是由埃博拉病毒（Ebola virus , EBOV）引起的动物疫源性传染病，死亡率可高达90%。 形态与性状：埃博拉病毒可呈杆状、丝状；直径约为70~90nm，为中 型病毒；单股负链RNA病毒；有包膜 病毒的蛋白：糖蛋白（GP）、核蛋白（NP）、VP35、VP40、VP30、VP24、RNA聚合酶（L蛋白） 病毒的生活周期：吸附、穿入、脱壳、生物合成、装配、成熟和释放 病毒的传染源和宿主动物：感染EBOV的患者，以及猴子、黑猩猩等灵长类动物 传播途径：接触传播，注射传播，性传播，气溶胶传播 主要临床特征： 一.早期主要为全身性病毒血症的症状和体征。 a.症状：早期多急性发病，表现为一系列非特异性症状； b.体征：体温以高热为主，波动较大；重症患者会出现低血压；脉搏-体温分离早期较为常见。 二.晚期表现为全身多脏器的广泛出血和肝肾功能的严重受损。 NP抗体研究目的、原因 由于埃博拉出血热在我国境内尚无病例出现，尤其需要储备血清学检测阳性质控物。 NP? 获得抗体？ 通过基因工程抗体技术构建并表达抗埃博拉病毒核蛋白NP人-鼠嵌合抗体，为埃博拉出血热血清学检测做人源阳性对照储备。 如何制备人鼠嵌合抗体 目的基因的获取 1 1 从分泌抗ebov np抗体的鼠杂交瘤细胞中提取相应RNA，逆转录合成cDNA，然后通过PCR技术扩增该目的基因。 表达载体的构建 2 将鼠抗体轻重可变区基因和人抗体轻重链恒定区基因插入到HL51-14质粒上，成功构建重组DNA分子。 将目的基因倒入受体细胞 3 将连接有轻重链基因的表达载体质粒用PEI转染293T细胞（该细胞是一种感染了腺病毒基因的人肾上皮细胞，其蛋白质表达含量高）。 目的基因的表达与检测 4 收获293T细胞产生的上清，用ELISA法检测人—鼠嵌合抗体的表达。 检测抗体是否成功表达： ELISA检测293T细胞是否成功表达人-鼠嵌合抗体 包被ebove np抗原4℃过夜 次日加入一抗为收获的嵌合抗体上清 二抗为HRP标记的抗人Fc抗体 4. 加底物显色，底物降解的量即为嵌合抗体的生成量 结果及其意义： 结果：改造过的人鼠嵌合抗体能与埃博拉病毒核蛋白抗原结合表明其具有抗体的生物学活性。这些均说明人鼠嵌合抗体的构建是成功的。 意义：作为Ebola血清学检测中人源阳性对照储备在埃博拉病毒检测上起到一定作用。对于抗埃博拉核蛋白抗体的研究，也为以后抗埃博拉病毒抗体的研究提供了一定的基础。 预防埃博拉 勤洗手 加强锻炼 避免与感染者直接接触 注意饮食卫生 身体不适立即去医院 不去有感染报道和怀疑的地方 参考文献 《埃博拉出血热》，第四军医大学出版社，第一版。 周荣平，孙丽娜，刘洋，芜为，李川，梁米芳， 仇佩虹.抗埃博拉病毒核蛋白NP人-鼠嵌合抗体的研究.病毒学报（32），2016，1：14-18。 Thank You! * * Content Layouts * * Content Layouts