生化实验溶液的配制..doc

甲基红(MR)试验／VP试验.原理? 细菌分解培养基中的葡萄糖产酸，当产酸量大，使培养基 的pH降至4。5以下时，加入甲基红指示剂而变红E甲基红的变色范围为pH4．4(红色)～pH 6．2(黄色))，此为甲基红试验。当细菌发酵葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸再变为乙酰甲基甲醇；乙酰甲基甲醇又变成2，3—丁二烯醇，2，3—丁二烯醇在碱 性条件下氧化成为二乙酰，二乙酰和蛋白胨中精氨酸胍基起作用产生粉红色的化合物，此为VP试验。这两个试验密切相关，对一种细菌而言，两者只能居其一 .培养基及试剂 ? 葡萄糖蛋白胨水溶液。 甲基红试剂：? 甲基红0．02g，95％酒精60mL，蒸馏水40ral。VP试剂：? 甲液、：a—萘酚酒精溶液(o—萘酚5g，无水乙醇100mL)。乙液：KOH溶液(KOH40g，水l00mL)o将甲液和乙液分别装于棕色瓶中，于4～10C保存。或：硫酸铜1g，浓氨水40mL，10％KOH950mL，蒸馏水10mLo MR试验方法? 取一种细菌的24h培养物，接种于葡萄糖蛋白胨水培养基中，置37C培养48～72h，取出后加甲基红试剂3～5滴，凡培养液呈红色者为阳性，以‘‘十”表示；橙色者为可疑，以“±”表示；黄色者为阴性，以“― ”表示。 VP试验方法? 取一种细菌的?24h纯培养物，接种于葡萄糖蛋白胨水培养基中，置37C培养48～72ho取出后在培养液中先加VP试剂甲液0.6mL，再加乙液 0.2mL，充分混匀。静置在试管架上，15min后培养液呈红色者为阳性，以“ +”表示；不变色为阴性，以“—”表示。1h后可出现假阳性。或者可以用等量的硫酸铜试剂于培养液中混合，静置，强阳性者约5min后就可产生粉红色反应。 ? 硫化氢试验 原理? 细菌分解含硫氨基酸，产生HS，与培养基中的醋酸铅或FeS04发生反应，形成黑色的硫化铅或硫化亚铁。 培养基? 可用成品微量发酵管、醋酸铅琼脂或三糖铁琼脂斜 面。 微量法? 取一种细菌纯培养物，接种于H2S微量发酵管中，置 37℃培养24h 后观察结果。培养液呈黑色者为阳性，以“ +” 表示，无色者为阴性，以“—”表示。?常量法? 用接种针蘸取纯培养物，沿试管壁作穿刺醋酸铅琼脂 或三糖铁培养基，37℃培养24—48h或更长时间，培养基变黑者为阳性。或将纯培养物接种于肉汤，肝浸 汤琼脂斜面或血清葡萄糖琼脂斜面，在试管壁和棉花塞间夹一6．5cmX0．6cra大小的试纸条(浸有饱和醋酸铅溶液*)，培养于37℃，观察纸条变黑者为阳性。 氧化型与发酵型(O／F)的测定 原理? 不同细菌对不同的糖分解能力及代谢产物不同，这种能力因是否有氧气的存在而异，有氧条件下称为氧化，无氧条件下称为发酵。这在区别微球菌与葡萄球菌、肠杆菌科成员中尤其有意义。培养基? 蛋白胨2g，氯化钠5g，磷酸氢二钾0．3g，葡萄糖10g，琼脂3g，1％溴麝香草酚蓝3mL，蒸馏水1000mLo将蛋白胨、盐、琼脂和水混合，加热 溶解，校tpH至7．2，然后加葡萄糖和指示剂，加热溶解；分装试管，3～4mL僧；115C，高压蒸汽灭菌20min，取出后冷却成琼脂柱。试验方法? 挑取18～24h的幼龄斜面培养物，穿刺接种，每种细菌接种两管，于其中l管覆盖lmL灭菌的液体石蜡，37C培养48h或更长时间，最长可达7d。结果判定? 只在没有覆盖石蜡的一管发酵糖产酸或产酸产气者属氧化型；两管均发酵糖产酸或产酸产气者为发酵型；两管都不生长者不予判定结果。 糖类分解试验 原理? 细菌分解糖的能力与该菌是否含有分解某种糖的酶密切相关，是受遗传基因所决定的，是细菌的重要表型特征，有助于鉴定细菌，含糖培养基中加入指示剂，若细菌分解糖则产酸或产酸产气，使培养基颜色改变，从而判断细菌是否分解某种糖或其他碳水化合物。培养基? 可用市售各种糖或醇类的微量发酵管。试验方法? 取某一种细菌的24h纯培养物分别接种到葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇、蔗糖培养基内，开口朝下，置灭菌培养皿中。37C培养24h，观察结果并记录。如果接种进去的细菌可发酵某种糖或醇，则可产酸，使培养基由紫色变成黄色(培养基内指示剂溴甲酚紫由pH7，0(紫色)一pH 5．4(黄色))，如果不发酵，则仍保持紫色。如发酵的同时又产生气体，则在微量发酵管顶部积有气泡。结果判定．用符号表示 无变化??????? -????? 培养液仍为紫色 产酸．??????? ????? 培养液变为黄色 产酸又产气??? ⊕???? 培养液变黄，并有气泡 吲哚(靛基质)试验原理? 有些细菌(如大肠杆菌)能分解蛋白质中的色氨酸产生吲哚，吲哚与对二 氨基苯甲醛作用，形成玫瑰吲哚而