电泳知识总结..doc

电泳是指带电粒子在电场的作用下发生定向迁移（与其本身所带电荷相反的电极移动）的现象。利用电泳现象将多组分物质分离、分析的技术叫做电泳技术。 2.生物大分子在电场中移动的速度由什么决定？ 答：样品性质方面：粒子大小，形状，带电荷多少，带电性质；电泳条件方面：介质阻力，电场强度，溶液黏度。 3. 粒子的移动速度(泳动速度V)与电场强度(E)、粒子所带电荷量(Q)成正比，而与粒子半径(r)及溶液粘度(η)成反比。非球形分子（如线状DNA）在电泳过程中受到更大的阻力，即粒子的泳动速度与粒子形状有关。 迁移率与下列（ D )因素无关？ A.电荷数量 B.粒子大小 C.溶液黏度 D.电场强度 电泳迁移率（/泳动度/淌度）μ?：带电颗粒在单位电场强度下的移动速度。 ?μ = V/E = Q/6πrη 【影响迁移率的因素： 1. 待分离大分子的性质 ：所带的电荷、分子大小和形状，分子带的电荷量越大、直径越小、形状越接近球形，则其电泳迁移速度越快； 2. 缓冲液pH和离子强度：pH值距pI愈远，Q越大，V越大 ；pH过高或过低?蛋白变性??缓冲液；缓冲液通常要保持一定的离子强度；离子强度过低或过高的不利影响； 3. 电场强度：E高，带电颗粒泳动快。过高，产生焦耳热，样品和Buffer扩散增加，条带增宽；蛋白变性。过低，电泳时间增加，扩散。当需要增大电场强度以缩短电泳时间时，需附有冷却装置； 4. 电渗 ：在 电场中液体对固体支持物的相对移动；当电渗方向与电泳方向一致时，会加快颗粒泳动速度，反之，当两者方向相反时，会减慢颗粒泳动速度； 5. 支持介质：筛孔越小，则颗粒在移动的过程中所受到的阻力也就越大；介质的纯度影响聚焦效果；介质的非特异性吸附会增大电渗。】 等电点的定义？蛋白质在等电点时有哪些特点？ 答：当溶液的pH为一定数值时，其中的蛋白质正负电荷相等，即净电荷为零，此时的pH值就是该蛋白质等电点pI。蛋白质在等电点时的溶解度最小。 6.下列不是区带电泳的是（ C ） A.纸电泳 B.醋酸纤维素薄膜电泳 C. 等电聚焦电泳 D.聚丙烯酰胺凝胶电泳 等电聚焦与等速电泳的差别？ 答：区带窄，分辨率高。 自由界面电泳：部分分离 电渗现象：外加电场作用下，与固体支持物接触的液体层发生移动的现象。 电渗流：电渗现象中液体的整体流动。是毛细管电泳分离的主要驱动力，是毛细管中的溶剂因轴向直流电场作用发生的定向流动。其大小直接影响分析结果的精确度，准确度。 9.（凝胶电泳）为什么要用支持介质？支持介质应具备哪些特性？ 答：抗对流；抗扩散。物理化学性质稳定；化学惰性——不干扰大分子的电泳过程；均匀，电内渗小，结果重复性好。 两大类支持介质薄膜类和凝胶类的特点？ 答：薄膜类化学惰性好，能将对流减到最小；分离主要原理：生物大分子的电荷密度。凝胶类高粘度和摩擦阻力?对流和扩散都小；具有分子筛作用。分离主要原理：电荷密度+分子大小。 在聚丙烯酰胺凝胶方法中，引发剂和加速剂的作用？ 答：引发剂：提供原始自由基，通过自由基传递，使Acr成为自由基，启动聚合反应。 加速剂：加快引发剂释放自由基的速度。Bis是交联剂。 决定PAG特性的主要因素：单体和交联剂的总浓度；单体和交联剂的比例。 凝胶总浓度一定时，Bis的含量影响凝胶孔径。PAG的分子筛效应取决于凝胶孔径与样品分子大小接近的程度。选择合适的凝胶浓度，完成不同的分离任务。 a:b10 凝胶脆、硬，呈乳白状； a:b100 凝胶呈糊状； a:b≈30 凝胶富有弹性，且完全透明； a2%和b0.5% 凝胶不可能聚合。 什么是分子筛效应？ 分子量或分子大小和形状不同的蛋白质通过一定孔径分离胶时，受阻滞的程度不同而表现出不同的迁移率，这就是分子筛效应。分子量小，阻力小，移动快；分子量大，阻力大，移动慢。 醋酸纤维素薄膜电泳的特点是什么？ 分离速度快、电泳时间短、样品用量少。因此特别适合于病理情况下微量异常蛋白的检测。 简述聚丙烯酰胺凝胶电泳特点及应用范围。 特点：具有机械强度好、弹性大、透明、化学稳定性高、无电渗作用、设备简单、样品量小（1μg～100μg）、分辨率高等。 应用范围：可用于蛋白质、核酸等分子大小不同的物质的分离、定性和定量分析。还可结合去垢剂十二烷基硫酸钠（SDS），以测定蛋白质亚基的相对分子质量。 13.聚丙烯酰胺凝胶电泳有什么优点？ （1）可以在天然状态分离生物大分子； （2）可分析蛋白质和别的生物大分子的混合物； （3）电泳分离