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植物显微技术 院系：园艺林学学院 专业：果树学 学号：08305110043 姓名：谢该生 2009年5月 湖北武汉 基因组原位杂交技术在植物研究中的应用 摘要，，，，， 关键词基因组原位杂交荧光原位杂交，植物，基因组Genomic in situ Hybridization Technology and It’s Application in Plant Abstract : Genomic in sit u hybridization ( GISH) technology is an important means in plant molecular cytogenetics research ,with it’s characteristic of safety ,accuracy ,visualization and rich information. It has been extensively applied in analysing hybrid chromosome or chromosome fragments , exploring species origin ,evolution and affinity ,revealing chromosome behavior and so on. This is a summary of GISH technology in plant study. A new developement of chromosome in situ hybridization and introduces how to do plant research through cell detection ,chromosome detection and gene detection by use of in situ hybridization are presented． Key words : Genomic in sit u hybridization ( GISH) ; Genome ; Chromosome 基因组原位杂交是以亲本之一的总基因组DNA做探针，另一亲本的基因组DNA做封阻，在荧光原位杂交技术的基础上发展起来的一种染色体/染色质检测技术。原位杂交（in situ hybridization， ISH），属于固相分子杂交范畴，它是用标记的DNA或RNA为探针在原位检测组织、细胞或染色体上特定的核苷酸序列的一种技术。 80年代末发展起来的荧光原位杂交技术in situ hybridization， ISH），属于固相分子杂交范畴，它是用标记的DNA或RNA为探针，在原位检测组织、细胞或染色体上特定的核苷酸序列的一种技术。该技术最早时使用放射性元素32P标记的外源核酸片段为探针与组织、细胞或染色体的特定序列杂交并进行检测。 荧光原位杂交技术（luorescence situ hybridization， FISH）就是在原位杂交技术基础上通过对标记技术的改进而来的。FISH用生物素、地高辛、荧光素等标记物标记探针，将标记的探针与组织、细胞或染色体的DNA、RNA原位杂交，通过荧光免疫反应检测目的DNA或RNA在组织、细胞或染色体上的位置，并通过荧光显微镜直接观察结果。FISH 的发展改变了以往用放射性标记做探针的弊端：如实验周期长，对操作人员危害大和废物难处理等，因此广泛的应用于人类医学、动物和植物学的研究中。FISH 技术在不断的发展，目前在植物研究中广泛使用的基因组原位杂交技术（genomic in situ hybridization， GISH）就是在荧光原位杂交技术上发展起来的。 基因组原位杂交的原理与荧光原位杂交相同，不同的是所用的探针。基因组原位杂交是以来源不同的亲本之一的总基因组DNA做探针，通过生物素地高辛荧光素等标记物标记后，再原位杂交到杂种染色体制片上，接着通过与该标记物耦合的荧光素免疫反应，检测该亲本染色体或染色体片段在杂种中的存在状况；而其它亲本的基因组总DNA（或非探针的其它DNA）以一定的浓度比例来封闭杂种染色体上探针的非特异结合位点，尽可能使杂种染色体上的特异位点暴露出来供探针杂交。基因组原位杂交技术分为5个主要步骤：即探针的制备和标记、染色体标本的制备、杂交反应、显色及荧光检测、杂交结果分析。具体的技术路线为：选取适宜做基因组原位杂交的实验材料；对所选的材料进行充分的酶解，以去除细胞壁和细胞质；将酶解后的材料进行染色体制片并从中选取质量好的片子用以杂交实验；同时提取亲本的总基因组DNA，分别制备成探针DNA和封阻DNA，用以制备杂交混合液。在杂交前对染色体制片进行一定程度的处理，以