药物分析第十五章甾体激素类药物的分析解析.ppt

E. 温度与时间 室温（25℃）反应40～45 min F. 干扰物的影响 选择性的测定C17位未被氧化和降解的药物 氧化物和水解产物不发生反应 1.原理 异烟腙（黄） HCl 420nm （二）异烟肼比色法 C3-酮基+异烟肼 H2O 肾上腺皮质激素 雄性激素 蛋白同化激素 孕激素 2.方法：对照品法 60 ℃ 异烟肼 无水甲醇 对照液 供试液 A 暗60′ 酸性 3.影响因素 A.反应速度（反应专属性） C3=O＞C17= O 、C20= O C11= O 不反应 B. 溶剂的选择 异烟肼盐酸盐→受溶解度的影响 无水甲醇 无水乙醇 甲醇对试剂的稳定性好 甲醇呈色强度较无水乙醇中高 乙醇对植物油的溶解度小 C.水分、温度、O2与光线的影响 含水量↑→腙水解↑→A↓→%↓ O2与光线对反应的影响不大 t℃ ↑ → ν↑ D.酸的种类和浓度及异烟肼的浓度 酸:异烟肼 = 2:1 吸光度最大 Δ4-3-酮基的甾体激素在室温不到1h即可定量地与酸性异烟肼反应；其他长时间放置或加热后方可反应完全，因此在反应条件下，本法对Δ4-3-酮基甾体具有一定的专属性。 E:反应的专属性 原理 λmax=465 △ △ 桃红 黄色 雌激素 2 O H 乙醇 - 4 2 SO H λmax=515 又称为铁-酚试剂法 （三）Kober反应比色法： 雌二醇-3-甲醚 λmax=465 λmax=515 要求：专属性强、灵敏度高； 甾体激素给药量少；血药浓度在ng/mL；-灵敏性 生物体内有内源性甾体激素，甾体激素药物在体内有多种代谢产物；-专属性 本章小结 1.结构：三种母核（雄甾烷，雌甾烷，孕甾烷） 各类激素的结构特点 2.性质和鉴别 与强酸呈色； 官能团反应（C17-α-醇酮基；C3-，C20-酮基；C17-甲酮基；酚羟基，炔基；卤素；酯反应） 紫外，红外，色谱 3. 杂质与检查 有关杂质（TLC，HPLC）；硒的检查；残留溶剂； 游离磷酸盐 4.含量测定 HPLC,UV,比色法（四氮唑盐，异烟肼，Kober反应） 简答题： 1、简述异烟肼比色法测定甾体类激素药物含量的原理及注意事项？ 2、简述四氮唑比色法中的注意事项。 3、甾体类激素药物可能含有哪些特殊杂质？各采用什么方法检查？ 4、甾体类激素药物有哪些鉴别方法？ * * * 人工合成代用品：非甾体化合物 己烯雌二酚 高效、长效 △4–3–酮 C17–α–醇酮基 C17–β–羟基 C17–甲酮基 A环为3–OH苯环 肾上腺皮质激素 + + 雄性与蛋白同化激素 + + 雌性激素 + + 孕激素 + + 鉴别反应 UV、羰基试剂、氨基脲反应 还原性（碱性酒石酸酮、氨制AgNO3） 可成酯 与亚硝基铁氰化钠、间二硝基苯反应 UV、与重氮苯磺酸盐反应 特殊官能团与分析方法 白色至微黄色粉末或结晶性粉末。 三氯甲烷中微溶至易溶； 甲醇或乙醇中微溶 乙醚或植物油极微溶 水中不溶 1. 性状与溶解度 2、熔点 一具有鉴定的意义；二则可以反映药物的纯度。 炔诺酮：熔点202～208℃ 3.比旋度 甾体激素多具有手型碳原子，具有旋光性。 4.吸收系数 （一）强酸的呈色反应 强酸： H2SO4、H3PO4、HClO4、HCl 原理：酮基先质子化，形成正碳离子，再与HSO4-作用呈色。 甾体激素类药物 硫酸、磷酸、高氯酸、盐酸 呈色 显 色 荧光 加水稀释 氢化可的松 棕黄色至红色 绿色 黄色至橙黄色 炔雌醇 橙红 黄绿 玫红絮状↓ 炔雌醚 橙红 黄绿 红色↓ 泼尼松 黄→橙 — 黄色渐变蓝绿色 泼尼松龙 深红 — 灰色絮状↓ 地塞米松 淡红棕色 — 颜色消失 苯甲酸雌二醇 黄绿色 蓝色 淡橙色 与硫酸显色反应 1. C17-α-醇酮基——还原性 A. 呈色反应 C17-α-醇酮基 四氮唑盐 OH- 呈色 B. 沉淀反应 C17-α-醇酮基 氨制硝酸银 银镜反应 C17-α-醇酮基 碱性酒石酸铜 Cu2O↓ （多伦试液） （斐林试液） 2.C3–酮基和C20–酮基 甾酮类 2,4-二硝基苯肼 呈色 异烟肼、硫酸苯肼 异烟腙（黄色） 睾酮 异烟双腙（黄色） 黄体酮 成腙反应中 C20–酮基受C18甲基的空间位阻影响，反应较慢，需加热或较长时间放置，才完成反应。 C3–酮基空间位阻最小，最易起反应，室温下生成单腙。 3.甲酮基或活泼亚甲基 蓝紫色 黄体酮 适用：具有甲酮基或活泼亚甲基的甾体激素类药物。 能与亚硝基铁氰化钠、间二硝基酚、芳香醛反应呈色。 黄体酮专属性反应。 黄体酮 其他甾体 亚硝基铁氰化钠 蓝紫色 淡橙色或不显色 又称为碱性硝普钠反应。 碱性 甲酮基： 有机氟 Fˉ 有机破坏 有机氯 4、卤元素的呈色反应 茜素氟蓝—硝酸亚铈 硝酸