课题1菊花的组织培养解析.ppt

细胞分化是否意味着细胞中遗传物质的改变？ 基因的选择性表达 * 专题3:植物的组织培养技术 （一）植物组织培养的基本过程 一、基础知识 1、植物组织培养的原理： 概念：高度分化的植物细胞，仍然具有发育成 完整新个体的潜能。 基础：生物体的每一个细胞都包含有该物种所 特有全套遗传物质，都有发育成为完整 个体所必需的全部基因。因为它们都是 由同一个受精卵细胞有丝分裂分化而来。 细胞的全能性 有丝分裂 受精卵 细胞分化 在个体发育中，细胞在形态、结构和生理功能上发生稳定性差异的过程叫做细胞分化。 细胞分化 1.离体 2.一定的营养物质 3.植物激素：主要是生长素和细胞分裂素 4.适宜的外界环境条件，例如无菌、适宜的温度、PH值、湿度、光照等 细胞全能性大小： 受精卵生殖细胞体细胞 植物细胞动物细胞 分化程度低的细胞分化程度高的细胞 2、植物组织培养的条件： 从活植物体上切下进行培养的那部分细胞、组织或器官。 2、植物组织培养的相关概念： ①外植体： 由高度分化的植物器官、组织或细 胞产生愈伤组织的过程，又称去分化。 脱分化产生的愈伤组织在培养过程中重新分化根或芽等器官的过程. 细胞排列疏松而无规则,是高度液 泡化的、成无定形状态的薄壁细胞. ②脱分化： ③再分化： ④愈伤组织: （1）不同的植物，培养的难易程度差别很大： ①烟草和胡萝卜的组织培养较为容易； ②枸杞愈伤组织的芽诱导比较难； （2）同一种植物材料的年龄、保存时间的长短 等也会影响实验结果 菊花的组织培养一般选择未开花植株的茎上部新萌生的侧枝。 （二）影响植物组织培养的因素： 1．植物材料的影响： 2、营养---MS培养基 A、大量元素: N、P、K、Ca、Mg、S B、微量元素:B、Mn、Cu、Zn、Fe、Mo、I、Co C、有机物：甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素、蔗糖 D、植物激素：生长素、细胞分裂素、赤霉素等 Ｎ、Ｐ主要影响蛋白质、核酸的合成； K、 Ca、Mg、S主要影响酶的活性。 蔗糖既是碳源也是调节渗透压的物质； 维生素能促进细胞分裂和诱导器官分化； 甘氨酸是蛋白质的组成成分，也是有机氮源。 常用植物激素：生长素、细胞分裂素和赤霉素 生长素、细胞分裂素是启动细胞分裂、脱分化和再分化的关键性激素 在生长素存在的情况下，细胞分裂素的作用呈加强的趋势 激素的使用顺序、使用的量及比例影响植物细胞的发育方向 3、植物激素的影响 生长素类： 2，4－二氯苯氧乙酸（2，4－D）、吲哚乙酸（IAA）、萘乙酸（NAA）、吲哚丁酸（IBA） 细胞分裂素类： 激动素（KT）、6－苄基嘌呤（ 6－BA）、玉米素（ZT） 赤霉素类： 赤霉酸（GA3） 使用顺序 实验结果 先使用生长素，后使用细胞分裂素 有利于细胞分裂，但细胞不分化 先使用细胞分裂素后使用生长素 细胞既分裂也分化 同时使用 分化频率高 激素的使用顺序影响植物细胞的发育方向： 思考：以下培养基出现的现象反应了什么问题？ 生长素　/　细胞分裂素 高 利于根的形成 适中 利于愈伤组织的形成 生长素 细胞分裂素： 有利于根的分化 生长素 细胞分裂素： 有利于芽的分化，抑制根的分化 生长素 细胞分裂素： ＝ 促进愈伤组织生长 4.pH、温度、光照 pH控制在5.8左右，温度控制在18－22℃,每日用日光灯照射12h。 激素用量的比例影响植物细胞的发育方向： 离体组织或细胞 植物体 脱分化 细胞分裂素≈生长素 愈伤组织 芽 根 细胞分裂素生长素 细胞分裂素生长素 再分化 植物细胞培养 不需要光 需要光 制备MS固体培养基 外植体消毒 接种 培养 栽培 三、实验具体操作过程 移栽 （一）制备MS固体培养基 MS培养基包括20多种营养成分，实验室一般使用4℃保存配制好的培养基母液来制备 1、配制各种母液 ①无机物中大量元素浓缩10倍，微量元素浓缩100倍，常温保存 ②激素类、维生素类以及用量较小的有机物一般可按1mg/ml的质量浓度单独配制成母液 ③用母液配制培养基时，需要根据各种母液的浓缩倍数，计算用量 2、配制培养基 分装到锥形瓶中，每瓶分装50ml或100ml ① 配制培养液 ② 调PH ③ 培养基的分装 由于菊花的茎段的组织培养比较容易，因此不必添加植物激素 3、灭菌 分装好的培养基连同其他器械一起进行高压蒸汽灭菌 琼脂加水并加热熔化，加蔗糖和各种母液 1、选材：菊花茎段，取生长旺盛的嫩枝 （二）外植体消毒 2、消毒 ①流水冲洗 菊花茎段用流水冲洗后