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现代分析检测技术 1.色谱分类： 按固定相所处的状态分类：柱层析：将固定相装填在金属或玻璃制成的管柱中，做成层析柱以进行分离的，为柱层析；毛细管色谱：把固定相附着在毛细管内壁，做成色谱柱的，为毛细管色谱；纸层析：利用滤纸作为固定相以进行层析分离的为纸层析。薄层层析：把吸附剂粉未铺成薄层作为固定相以进行层析分离的为薄层层析。 按色谱分离的原理分类:吸附色谱：固定相为吸附剂，利用它对被分离组分吸附能力强弱的差异来进行分离。气固色谱和液固色谱属于这一类。分配色谱：是利用各个被分离组分在固定相和流动相两相问分配系数的不同来进行分离的，气液层析和液液层析属于这一类。离子交换色谱：以离子交换剂作固定相，利用各种组分的离子交换亲和力的差异来进行分离。凝胶色谱：又称排阻色谱： 用凝胶作固定相，利用凝胶对分子大小不同的组分所产生阻滞作用的差异未进行分离。 吸附剂：粒度均匀的细小颗粒；较大的表面积和一定的吸附能力；吸附剂与欲分离的试样和所用的洗脱剂不起化学反应，不溶于洗脱剂中。常用的吸附剂有：氧化铝、硅胶、聚酰胺 氧化铝：氧化铝具有吸附能力强、分离能力强等优点。中性氧化铝：适用于醛、酮、醌、酯、内酯化合物及某些苷的分离；酸性氧化铝：适用于酸性化合物，如酸性色素、某些氨基酸，以及对酸稳定的中性物质的分离；碱性氧化铝：适用于分离碱性化合响如如生物碱、醇以及其它中性和碱性物质。氧化铝的活性：活性和含水量密切有关；活性强弱用活度级I～V级来表示，活度I级吸附能力最强，V级最弱。通过加热至不同温度，可以改变氧化铝的活性，分离弱极性的组分选用吸附活性强一些的吸附剂，分离极性较强的组分，应选用活性弱的吸附剂。 硅胶：硅胶具有微酸性，吸附能力较氧化铝稍弱，可用于分离酸性和中性物质，如有机酸、氨基酸、萜类、甾体等。 聚酰胺：由已内酰胺聚合而成，又称聚己内酰胺，聚酰胺分子内存在着很多的酰胺键，可与酚类、酸类、酮类，硝基化合物等形成氢键，因而对这些物 质有吸附作用，酚类和酸类以其羟基或羧基与酰胺键的羰基形成氢键，芳香硝基化合物和醌类化合物是以硝基或醌基与酰胺键中游离胺基形成氢键。聚酰胺吸附规律：能形成氢键基团较多的溶质，其吸附能力较大，对位、间位取代基团都能形成氢键时，吸附能力增大，邻位的使吸附能力减小，邻位的使吸附能力减小，能形成分子内氢键者，吸附能力减小。 流动相及其选择： 流动相的洗脱作用实质上是流动相分子与被分离的溶质分子竞争占据吸附剂表面活性中心的过程。 使试样中吸附能力稍有差异的各种组分分离。就必须根据试样的性质，吸附剂的活性，选择适当活性的流动相。 流动相极性较弱时，可使试样中弱极性的组分洗脱下来，在层析柱中移动较快，而与极性较强的组分分离。 强极性和中兴等极性的流动相适用于强极性和中高等极性组分的分离。 组分极性的一般规律：（1）常见的功能团极性增强次序：烷烃＜烯烃，醚类＜硝基化合物＜二甲胺＜酯类＜酮类＜醛类＜硫醇＜胺类＜ 酰胺＜醇类＜ 酚类＜羧酸类。（2）当有机分子的基本母核相同时，取代基团的极性增强，整个分子的极性增强；极性基团增多，整个分子的极性增强。分子中双键多，吸附力强，共轭双键多，吸附力增强。（3）分子中取代基团的空间排列对吸附性能也有影响，如同一母核中羟基处于能形成内氢键位置时，其吸附力弱于不能形成内氢键的 化合物。 流动相按其极性增强顺序：（1）石油醚环己烯四氯化碳三氯乙烯苯甲苯二氯甲烷氯仿乙醚乙酸乙酯乙酸甲酯丙酮正丙醇乙醇甲醇吡啶酸，水（2）溶剂按不同的配比配成混合溶剂可以调节溶剂的极性，优化流动相（3）溶解试样用的溶剂，其极性应与流动相接近，以免因它们极性相差过大而影响层析分析。 3. 分配色谱： （1）分配层析是根据预分离组分在两种互不混溶（或部分混溶）溶剂间溶解度的差异来实现的。 （2）在层析中，这两种互不混溶的溶剂之间是流动相；另一种是吸收在载体或担体（往往也叫它们称之为吸附剂），这种溶剂在层析过程中不流动，是固定相。 （3）分配色谱的担体: 担体也称吸附剂，起负载固定相的作用，本身是惰性的。分配柱层析中常用担体有如下几种：硅胶：在分配柱层析中作用作担体的硅胶应在较低的温度下活化，使其表面残留一定的水分作固定相。纤维素：纤维素上有许多羟基，易与水形成氢键而将水吸附，这种吸附着的水分形成分配柱层析中的固定相。硅藻土：系天然存在的非晶形硅胶，其中SiO2外还含Al2O3Fe2O3,GaO,Na2O和有机物及水分等；需经精制才能供层析用。 4. 正向色谱和反向色谱 正向色谱：（a）使用范围：溶于水的有机物，如糖类、氨基酸等的分离（b）固定相为：强极性亲水性溶剂（水、稀硫酸、甲醇、甲酰胺）（c）流动相：一般是与水不相混溶的有机溶剂正丁醇、正戊醇加入适量的弱酸和弱碱如乙酸吡啶等调节PH值