生物化学第十五章DNA的生物合成选编.ppt

DNA的生物合成 一、DNA的生物合成 DNA的生物合成有两条途径： DNA的复制（主要）；RNA的反向转录（次要）。 （一）DNA的半保留复制 提出背景： 1953年Watson和Crick在DNA双螺旋结构基础上提出了DNA半保留复制假说。 子代DNA分子中总是保留一条来自亲代DNA的复制方式称为“半保留复制”。 1958年Meselson和Stahl首次用同位素标记法得到证实。 DNA的半保留复制的概念 （二）DNA复制的起始点和方向 1、起始点 DNA复制的起始点是含有100-200个碱基的一段DNA。先是DNA的两条链在起始点分开形成叉子样的“复制叉（replication fork）”，也叫“生长点（growing point）”随着复制叉的移动完成DNA的复制过程。 细胞内存在能识别起始点的特种蛋白质。 2、方向 DNA复制可以朝一个方向（单向复制，unidirectional），也可以朝两个相反方向进行（双向复制，bidirectional，主要）。 DNA复制一般是对称的，两条链同时进行，也有不对称的，一条链复制完后再进行另一条链的复制。 在迅速生长的原核生物中，第一个染色体DNA分子的复制还未完成，第二个DNA分子就在同一个起始点上开始复制。 DNA聚合酶催化的链延长反应 DNA聚合酶的3′- 5′外切酶水解位点 DNA聚合酶5′- 3′外切酶活力 大肠杆菌DNA聚合酶Ⅲ全酶的结构和功能 大肠杆菌三种DNA聚合酶比较 连接酶连接切口 复制的条件 （1）DNA亲链（模板）：复制前DNA先解螺旋、解链形成两条单链，两条单链都可以作为模板； （2）四种三磷酸脱氧核苷（dNTP）作为底物； （3）一系列酶； （4）一小段寡核苷酸链作为“引物”。 DNA聚合酶催化的链延长反应 大肠杆菌复制起点成串排列的重复序列 DNA的双向和单向复制 原核细胞DNA的半不连续复制复制过程 大肠杆菌复制体结构示意图 复制叉处前导链和随后链同时合成的工作模型 大肠杆菌染色体复制的终止 DNA的复制的分子机制 包括三个阶段： （1）复制的起始 起始点：DNA的复制并非在DNA分子的任何部位都可以起始，而是在特定的起始部位开始的。 原核细胞的环状DNA一般只有一个起始点。真核细胞染色体DNA分子比原核细胞DNA分子大得多，其线状DNA具有多个复制起始点，甚至多达上千个，从而形成许多独立复制的核苷酸序列，称为“复制单位”或“复制子”。 复制开始时，先由拓扑异构酶Ⅱ和解链酶与DNA的复制起始部位结合，使该部位解螺旋、解链，形成复制点，同时单链结合蛋白与该处解开的两条模板链牢固结合，使其保持可复制状态。每个复制点结构犹如叉状，称为“复制叉”。 引物酶具有辨别DNA模板链起始点的能力，在此处由模板链指导，按照A-U、G-C的碱基配对原则聚合三磷酸核苷（NTP），形成RNA引物。 细菌的RNA引物较长，一般含有50-100个核苷酸残基，哺乳动物的RNA引物较短，一般含有10个左右的核苷酸残基。 （2）DNA片段的合成与延伸 RNA引物形成之后，在两条DNA模板链的指导下，在DNA聚合酶Ⅲ的催化下，按照A-T、G-C的碱基配对原则在引物的 3’-OH端逐个聚合三磷酸脱氧核苷，形成两段DNA片段。在复制中，拓扑异构酶Ⅱ和解链酶不断向前推进，复制叉就不停地向前移行，新合成的DNA片段也就相应的延伸。合成的方向为5’ 3’。 前导链：在复制叉的起点处复制时，一条子链的延伸方向与复制叉前进方向相同，称为“前导链”。 后随链：另一条子链的延伸方向与复制叉的前进方向相反，称为“后随链”。 复制开始后，随着复制叉向前移行，前导链向复制叉移行方向连续延伸；而后随链沿着复制叉移性的反方向断续合成，开始合成的是一段一段的DNA片段（冈崎片段）。 当一个冈崎片段合成后，随着复制叉的前移，在新分叉处又合成一段RNA引物，在引物的3’-OH端再合成一段冈崎片段，如此进行下去便合成了一条RNA引物-冈崎片段相间排列的序列。 复制到了一定程度，DNA聚合酶Ⅰ的核酸外切酶活性便将RNA引物切除，同时它的DNA聚合酶Ⅰ活性催化冈崎片段由3’-OH端延长（每个核苷酸单位被切除后立即被与模板链上相应位置碱基互补的脱氧核苷酸补上），直达前一个冈崎片段的5’-末端为止。 （3）完成子代DNA分子的形成 复制进行到一定程度，核酸外切酶将前导链的RNA引物切除，由DNA聚合酶Ⅰ催化其延长补缺；DNA连接酶将相邻的