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生物工程下游技术复习题 基本知识点 1、经典的蛋白质测定方法有 凯氏定氮法 文献上常见的发酵罐比拟放大法仍以近似法则与因次分析的结合为主。 综合知识点 1、硅胶的化学修饰和改性 硅胶本身只能充作正向色谱填料，它必须经过种种化学修饰或改性，才能改变其表面的化学性质，成为适用于不同分离模式的色谱填料。 表面硅羟基的化学修饰 硅可以与诸多元素形成稳定的共价键，这是形成品种繁多的含硅化合物已经硅胶进行化学修饰的基础。硅羟基的化学修饰通常采取以下三种途径： ①通过氯化反应：除去了物理吸附水的硅胶，可以将硅羟基转化为活泼的表面硅氯基。 ②通过氯硅烷与硅羟基的反应 通过氯硅烷可以将各种烷基链引入硅胶表面，特别是引入长链正烷基链或芳香基以制备反向固定相。 ③通过烷氧基硅烷与硅羟基的反应 烷氧基硅烷与硅胶额可以进行缩合反应，使硅胶表面带上环氧基或氨基等官能团，在此基础上可以很方便的进一步进行反应或修饰。 包敷与涂层 可以通过不同的途径以制备稳定的聚合物涂层，也可以将含双键的聚合物涂于硅胶表面，使其表面带上双键。令其与随后涂敷上去的第二单体进行共聚，便可在硅胶表面上形成致密的聚合物膜。 整体修饰 所谓整体修饰，指的是利用不同官能团的卤代硅烷或烷氧基硅烷的水解、缩聚反应，以直接制出空间交联型、含不同R基的硅胶。 硅烷化试剂 硅胶的化学修饰方法中，表面硅羟基的修饰仍然是主要的途径，所使用的组要试剂是各种取代硅烷，既硅烷化试剂。氯硅烷是常用的硅烷化试剂，但它有一些很明显的缺点。相比之下烷氧基硅烷对环境和人体的危害性要小的多。 蛋白质工程中，常用的蛋白质复性方法 蛋白质工程中常会遇到包含体问题，包含体基本是由蛋白质组成，其中大部分是克隆表达的产物，这些产物在一级结构上是正确的，但在立体构型上却是错误的，因此没有生物学活性。因此要涉及到蛋白质复性问题。蛋白质的复性主要有以下几种方法： 稀释复性与透析复性 使蛋白质最常用的有两种方法。一种方法是将溶液稀释，导致变性剂浓度降低，蛋白质开始复性。 另一种方法是用透析、超滤或电渗析除去变性剂。 色谱复性 色谱复性的方法很多，且原理各不相同，依据其抑制凝聚的特点，将其分为两大类。一类是以凝胶过滤为代表的非吸附型色谱复性。另一类是吸附型色谱复性，其中常用的吸附色谱复性包括金属螯合色谱复性、亲和色谱复性、离子交换色谱复性、疏水相互作用色谱复性等。 ①凝胶过滤是通过分子筛效应将变性蛋白质与变性剂分离，从而使变性蛋白质进入复性溶液进行复性。 ②金属螯合色谱复性主要是针对Histine tag（组氨酸标签）的基因工程蛋白质。将含有带组氨酸标签蛋白质的裂解液流过含有镍的亲和层析柱，组氨酸就可以与镍螯合从而结合在柱子上，而裂解液中其他蛋白质由于没有组氨酸标签而直接流出柱子，从而达到分离目的。 ③亲和色谱复性是利用抗原抗体相互作用、酶与底物相互作用或其他特异性相互作用帮助蛋白质复性。 ④其它吸附色谱复性方法。离子交换色谱、疏水作用色谱等色谱技术，通过选择合适的条件，溶解了的包含体可以通过各种作用达到复性。 微囊化动物细胞及其应用 目前微囊化细胞可以在两方面应用，意识培养微囊化动物细胞以生产一些药物；二是作为药物直接用于治疗或作为筛选药物之用。 生产药物上的应用 单克隆抗体的生产 微囊化哺乳动物的主要应用是单克隆抗体的生产。微囊工艺已生产以克计的单克隆抗体。 高值生化药物的生产 一些生化药物的生产，总生产率可达培养瓶生产的5被以上。而且，产物在电泳上显示纯度明显高。 干扰素的生产 通过对一些培养生产干扰素发现，细胞在微囊中生长比悬浮胖或单层培养更旺盛。 在治疗及药物筛选上的应用 人工器官 微囊化动物细胞在排除免疫反应上可能有普遍意义。人们已将某些器官的细胞微囊化并植入体内以期待能代替这些器官的功能。 抗癌药物的筛选 微囊化的肿瘤细胞用于估价抗癌药物对活体的作用。人的肿瘤细胞经微囊化后注入小鼠腹腔中，服用受检的抗癌药，检测微囊化的肿瘤细胞对药物的反应，结果发现抗癌药能穿透微囊的膜作用于微囊中的肿瘤细胞，抑制和杀灭的水平与其他体外和体内测定的药效一致。 4、同无机基质的填料相比较，有机高分子类型填料的普遍特征 同无机基质的填料相比，有机高分子类型填料普遍具有如下特征： ①它们的基质微球可以广泛选择各种天然的多糖为原料来制备，也可以广泛使用各种的单体和交联剂来制备。这些高分子材料一般都容易进行化学改性处理，所得到的填料普遍具有良好的色谱选择性。 ②它们对于被分离样品有较强的负载能力，有较高的色谱容量。这对于不哦他能够规模的制备色谱来说是尤为适宜的。 ③他们具有良好的耐酸、耐碱和耐溶剂处理的化学稳定性，可以在广泛的pH值范围内使用，并且有较长的柱寿命和较好的再生能力。 ④它们不易产生不可逆的非特