MERSCoV的样品采集和实验室检测.ppt

rRT-PCR假阴性结果 标本质量不好； 标本采集时间晚，或早于发病时间； 标本处理和运送不合适； 其它技术原因：如病毒变异或者PCR被抑制。 （三）血清中抗体检测方法 IFA法 ELISA法 NT法 血清学检测 恢复期血清中东呼吸综合征冠状病毒抗体较急性期血清抗体水平呈4倍以上升高，证实为MERS-CoV阳性病例。 单份血清（恢复期血清）中东呼吸综合征冠状病毒抗体阳性，证实有感染。 人群血清学检测：感染率调查；确定危险人群。 试剂需要向相关实验室索要。 四、解除隔离 体温基本正常、临床症状好转，病原学检测连续两次阴性，可出院或转至其他相应科室治疗其他疾病。 五、总结 MERS-CoV是个新型病毒。 实验室标本最好使用下呼吸道标本。 多位点，多次数采样。 使用rRT-PCR法检测upE和ORF 1a两种靶目标阳性者，为MERS-CoV确诊阳性。不符合者，测序。 双份血清学可以诊断MERS-CoV。单份血清，可以诊断是否感染。 谢谢！ 人有了知识，就会具备各种分析能力， 明辨是非的能力。 所以我们要勤恳读书，广泛阅读， 古人说“书中自有黄金屋。 ”通过阅读科技书籍，我们能丰富知识， 培养逻辑思维能力； 通过阅读文学作品，我们能提高文学鉴赏水平， 培养文学情趣； 通过阅读报刊，我们能增长见识，扩大自己的知识面。 有许多书籍还能培养我们的道德情操， 给我们巨大的精神力量， 鼓舞我们前进。 * MERS-CoV的样品采集和实验室检测 一、概况 中东呼吸综合征冠状病毒（Middle East Respirtory Syndrome Coronavirus, MERS-CoV) 2012年6月13日，沙特诊断首例中东呼吸综合征。追溯调查，2012年3月该病就已经在中东存在。 一、概况 2012年9月，命名为新型冠状病毒（novel coronavirus)。 2013年5月23日，由国际病毒分类委员会命名为中东呼吸综合征冠状病毒（97.8%）。 20多个国家有病例报告，均和中东有流行病学关联，中东以外地区尚为发现原发感染病例。 引起人类疾病的冠状病毒 人冠状病毒：HCoV‐OC43、HCoV‐HKU1、HCoV‐229E、HCoV‐NL63 SARS-CoV MERS-CoV 病原学 β类冠状病毒的2c亚群，无包膜，单股正链的RNA病毒 。 和蝙蝠的CoV基因相似性70.1%，和SARS病毒的基因相似性54.9%。 MERS-CoV受体 二肽基肽酶（hDPP4，也称为CD26)，位于人深部呼吸道组织。 该受体宿主分布广泛：蝙蝠、人、猪 二、病例定义 疑似病例 符合流行病学史和临床表现，但尚无实验室确认依据。 中东呼吸综合征病例诊疗方案（2014年版） 临床诊断病例 满足疑似病例标准，仅有实验室阳性筛查结果（如仅呈单靶标PCR或单份血清抗体阳性）的患者。 满足疑似病例标准，因仅有单份采集或处理不当的标本而导致实验室检测结果阴性或无法判断结果的患者。 中东呼吸综合征病例诊疗方案（2014年版） 确诊病例 疑似和临床诊断病例具备下述4项之一： 至少双靶标PCR检测阳性。 单个靶标PCR阳性产物，经过基因测序确认。 从呼吸道标本中分离出中东呼吸综合征冠状病毒。 恢复期血清中东呼吸综合征冠状病毒抗体较急性期血清抗体水平阳转或呈4倍以上升高。 中东呼吸综合征病例诊疗方案（2014年版） 无症状感染者 无临床症状，但具备实验室确诊依据4项之一者。 中东呼吸综合征病例诊疗方案（2014年版） 三、实验室检测方法 WHO推荐的实验室指南 第1版：2012.12 第2版：2013.9 第3版：2014.6 三、实验室检测方法 病毒分离 病毒核酸检测 血清免疫学检测 （一）标本采集注意事项 采集标本的医务工作者，必须穿戴防护MERS-CoV感染的个人防护服（PPE)。 正确的采集标本，及时消毒、处理、清除污染。 采集对象 疑似病例 密接者不作为采样对象。 特殊情况下，当能够证明密接者连续14天接触患者时，可采集密接者上呼吸道标本。 采集的标本 下呼吸道标本的病毒载量高。 上呼吸道标本亦可检出。 血液标本中可检出病毒、抗体。 尿、粪便标本病毒载量较低。 采样的时间 PCR法检测的标本 在发病7天内采集。 解除隔离前，连续2天采集。 抗体检测的血液标本采集时间 双份血： 第1份血液标本：发病7天内； 第2份血液标本：第1份血液标本采集后，间隔14-21天采集。 单份血：发病14天后采集。 标本采集主要材料 无菌拭子：聚丙烯纤维头的拭子。 15ml的采样管、带螺旋盖的器皿。 3ml病毒保存液、生理盐水等。 真空采血管（红、黄、橙黄）、采血针等。 标本的采集方法 下呼吸道标本： 痰：由患者直接将痰液收集于有盖能够密闭的无菌器皿内。 抽吸液