卫生学评价(化妆品)剖析.ppt

第一节 化妆品卫生学方面的主要要求 总则 毒理学试验方法 卫生化学检验方法 微生物检验方法 人体安全性和功效评价检验方法 1.化妆品微生物的质量要求 菌落总数 粪大肠菌群 铜绿假单胞菌 金黄色葡萄球菌 霉菌和酵母菌 具体规定： 眼部化妆品及口唇等粘膜用化妆品以及婴儿和儿童用化妆品菌落总数不得大于500CFU/mL 或500CFU/g。 其它化妆品菌落总数不得大于1000CFU/mL 或1000CFU/g。 每克或每毫升产品中不得检出粪大肠菌群、铜绿假单胞菌和金黄色葡萄球菌。 化妆品中霉菌和酵母菌总数不得大于100CFU/mL 或100CFU/g。 2．化妆品中所含有毒物质(常见污染物)的限量规定 第二节 卫生化学检验方法 第三节 微生物检验方法 一、常见污染化妆品的微生物 微生物检验的基本要求 微生物检验样品的采集、保存及制备 随机抽取相应数量的包装单位。 应从批的整体中各部位抽取， 如从四角+中间；分上、中、下层；或上、中上、中、中下、下层； 梅花点式等。 所有接触样品的工具、容器都必须保持清洁。 3、检验量 检验时，应分别从两个包装单位以上的样品中共取10 g或10 mL。包装量小于20g的样品，采样量可适当增加样品包装数量。 1. 化妆品中细菌总数的检测 菌落总数（Aerobic bacterial count）是指化妆品检样经过处理，在一定条件下培养后（如培养基成分、培养温度、培养时间、pH 值、需氧性质等），1g（1mL）检样中所含菌落的总数。所得结果只包括一群本方法规定的条件下生长的嗜中温的需氧性菌落总数。 化妆品中防腐剂抑制细菌的生长作用。 在含卵磷脂、吐温80营养琼脂培养基进行中和。对尼泊金类、苯甲酸类、六氯酚类等有效，但对卡松类的防腐剂的中和效果有限。 卡松的中和剂半胱氨酸,可较好的中和卡松的抑菌效果。 因此，检测时不同的防腐剂加入不同的中和剂。 为便于区别化妆品中的颗粒与菌落，可在每 100mL 卵磷脂吐温 80 营养琼脂中加入 1mL 0.5％的 TTC（,3,5-三苯基氯化四氮唑） 溶液，如有细菌存在，培养后菌落呈红色，而化妆品的颗粒颜色无变化。 在膏霜类化妆品中，微生物都是吸附或附着于颗粒状的原料中，检测时不易洗脱下来。因此，需要验证检测方法的有效性。 2.化妆品中粪大肠菌群的检测 粪大肠菌群（Fecal coliforms）是一群需氧及兼性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌，在 44.5℃±0.5℃培养 24h～48h ，能发酵乳糖产酸并产气。 基本操作方法 1、取稀释后的检液加到双倍乳糖胆盐培养基中， 置于44.5 ℃培养24~48h，如不产酸也不产气，则为阴性。 2、如产酸产气，则接种到琼脂平板上，置37 ℃培养18~24h， 典型特征为紫黑色，中心颜色较深。挑选可疑菌落， 涂片做革兰染色镜检。 3、同时接种到蛋白胨水中，置 44 ℃培养24h，加入靛基质试剂 约0.5mL，观察。阳性者液面呈玫瑰红色， 阴性呈试剂本色。 4、两种现象共存，可报告样品中检出 粪大肠菌群。 3.化妆品中铜绿假单胞菌的检测 铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）属于假单胞菌属，为革兰氏阴性杆菌，氧化酶阳性，能产生绿脓菌素。此外还能液化明胶，还原硝酸盐为亚硝酸盐，在 42℃±1℃条件下能生长。 基本操作步骤 1、增菌培养：将稀释样加到SCDLP（Soya Casein Digest Lecithin Polysorbate Broth）培养基中37℃培养18~24h，若有菌，则生成一层薄菌膜，呈黄绿色或蓝绿色。 2、分离培养：从上述薄膜处挑取培养物，划线接种在十六烷基三甲基溴化铵琼脂平板上，37℃培养18~24h。绿脓杆菌的菌落扁平无定型，向周边扩散或略有蔓延，表面湿润，呈灰白色，周围有水溶性色素。 验证试验： a 染色镜检：挑取可疑菌落，涂片，革兰染色，镜检为革兰阴性者进行氧化酶试验。 b 氧化酶试验：将可疑菌落涂在滤纸片上，滴加新配制二甲基对苯二胺，15~30s出现红色为阳性。 c 绿脓菌素试验：取可疑菌落，接种在绿脓菌素测定培养基上， 37℃培养24h，加入氯仿，待氯仿提取液呈蓝色，加盐酸，如盐酸呈红色，则被检物中含绿脓菌素。 4.化妆品中金黄色葡萄球菌的检测 金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）为革兰氏阳性球菌，呈葡萄状排列，无芽胞，无荚膜，能分解甘露醇，血浆凝固酶阳性。 基本操作步骤 1、增菌：将稀释样加到SCDLP培养基或7.5%NaCl肉汤培养基中37℃培养24h。 2、分离培养： 取培养液划线接种在BairdParker平板或血琼脂平板，37℃培养24~48h。 验证试验： a 染色