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凋亡调节因子与药物耐受性 　　肿瘤细胞对化疗药物的耐药性是临床化疗失败的重要原因。本文综述细胞凋亡调节因子p53、bcl-2、bax等对肿瘤细胞耐药机制的影响和p53蛋白等对P一糖蛋白和多药耐药相关蛋白表达的调节作用，并介绍部分多耐药性新的研究进展。 　　放疗和化疗对肿瘤细胞有明显杀伤作用。然而成功治疗的一个重要障碍是肿瘤细胞对上述治疗无反应，并出现耐受细胞群，导致恶性肿瘤复发或浸润进展。因此了解细胞对化疗药物耐受基础成为许多实验研究的热点。一般而言，研究的重点是解释治疗因子怎样达到细胞内靶位点，并检查药物与靶位点相互作用的分子基础，如高水平表达MDRI基因能够限制多种药物在细胞内的浓度，并引起多耐药性（MDR）。 　　最近几年里，探索和了解细胞凋亡机制，对肿瘤细胞获得或失去耐受细胞毒性机制有了新的认识。 　　1 凋亡调节因子对耐药性的调节作用 　　许多药物能诱导细胞凋亡，包括抗代谢药、脱氧核苷酸合成抑制剂、DNA拓扑异构酶抑制剂、烷化剂及干扰微管药物等[1]。化疗药物引起凋亡的过程还不十分清楚，可能是药物打断了正常的细胞生长周期所致[2]。凋亡是一种可以被激活或抑制的可调节过程，因此可能还有在某些情况下药物耐受性的新解释。 　　1.1 p53 　　野生型p53（wt-p53）在细胞生长过程中以“分子警察”身份监视细胞内DNA状态，当DNA受损后，p53通过转录后稳定机制抑制细胞停留在G1期，使细胞有时间修复，若修复失败，wt-p53将角发细胞凋亡。wt-p53缺乏或发生突变，将失去“分子警察”作用，不能诱导受损细胞凋亡，而使受损细胞得以生存。但由于细胞失G1期细胞周期检查点的DNA损伤监视作用，易造成诸如缺失、扩增和易位等染色体畸变。 　　Malcomson[3]采用温控p53表达载体转染鼠胚胎成纤维细胞株，在鬼臼乙叉甙（VP-16）作用下，32℃条件时，wt-p53表达，细胞滞留在G1期，明显表现出对药物介导凋亡的耐受性；而在37℃时，表达突变型p53，细胞在VP-16作用下，无明显生长抑制，继续增殖，并显示出剂量依赖性的细胞凋亡增多。提示wt-p53能介导细胞对VP-16的耐受性。wt-p53介导的耐药性可能与药物作用特点有关。VP-16为细胞周期特异性药，主要作用于细胞周期的S期，干扰DNA的合成。一定剂量的VP-16作用细胞后，wt-p53使得细胞滞留在G1期而不继续增殖，因此，VP-16作用的靶位点减少，如同TopoⅡ酶含量下降介导的耐药性一样，引起细胞对VP-16的耐药性。Wosikowski[4]检测13例对阿霉素（ADM）、长春花碱、顺铂（CDDP）、VP-16和胺苯丫啶等耐药的乳腺癌细胞株，仅1例发生p53基因突变。 　　但许多学者认为低浓度化疗药物可引起表达wt-p53的细胞凋亡，在缺乏wt-妇生基因突变后，须大剂量药物方能引起细胞死亡[5]、wt-p53的缺失或突变间接导致了药物耐受性。Lowe[6]通过体内实验发现，表达Wt-p53基因的肿瘤细胞在经γ放射性和ADM治疗后，绝大多数细胞发生凋亡；相反，相同因子治疗p53基因缺陷的肿瘤细胞MEFS，对放疗和几种化疗药物有较强的耐药性。但将wt-p53基因转染到MEFS细胞，低剂量放疗，或小剂量的ADM、VP-16等药物处理后细胞迅速凋亡。另有报道wt-p53能促进体外培养的人粘液表皮样癌细胞凋亡。 　　p53对细胞耐药性的调节可能是双向的，具体作用方式可能与细胞种类、状态及药物作用特点和剂量有关。如突变型p53可能更多引起细胞对细胞周期非特异性药物耐受，而wt-p53介导细胞对某些细胞周期异性药物耐受。 　　1.2 Bcl-2家族 　　一些研究发现bcl-2基因家族蛋白表达水平变化，能显著改变肿瘤细胞株对化疗药物诱导凋亡的阻抗。Dole[7]用bcl-2表达载体转染人类神经母细胞瘤细胞株Shep-1，发现高表达bcl-2克隆的细胞株对CDDP和VP-16引起的细胞毒性呈剂量依赖性阻抗。Miyashita[1]采用基因转染方法，发现bcl-2能使细胞增加对地塞米松、氨甲喋呤、阿糖胞苷、长春新碱（VCR）、VP-16和CDDP等药物耐受性。与对照组细胞相比， bcl-2蛋白并不影响药物对肿瘤细胞增殖的抑制作用，但在维持细胞存活中起着重要调节作用。在VP-16和CDDP等化疗药物去除后，bcl-2蛋白能够重新启动细胞增殖，使细胞获得耐药性。 　　Pantazis[8]研究VCR诱导人白血病细胞株U-937/WT形成VCR耐药细胞亚株U-937/RV，在U-937/WT细胞中不能检出凋亡抑制蛋白bcl-2和bcl-xl表