第十八氨基酸已.pptVIP

* 优先合成 反馈抑制 阻遏 ④ ① O-琥珀酸高丝氨酸 天冬氨酸 天冬氨酰磷酸 天冬氨酸-β-半醛 高丝氨酸 二氢吡啶-2，6-二羧酸 赖氨酸 高丝氨酸磷酸 苏氨酸 蛋氨酸 异亮氨酸 ② ③ ⑤ 高丝氨酸脱氢酶hom 天冬氨酸激酶 * 一、赖氨酸的生物合成途径 微生物的赖氨酸生物合成存在两条不同的途径，即二氨基庚二酸途径与α-氨基已二酸途径。前者存在于细菌、绿藻和高等植物之中，后者存在于酵母霉菌之中。生产上用谷氨酸棒杆菌、北京棒杆菌、黄色短杆菌等细菌。 理想的产生菌应为hom–+AECr+AHVr 高丝氨酸脱氢酶（hom） S-（2-氨基乙基）-L-半胱氨酸(AEC)——赖氨酸结构类似物 ?-氨基-?-羟基戊酸(AHV)——苏氨酸结构类似物 第二节 赖氨酸发酵 * * 二、赖氨酸发酵的研究 1.防止回复突变（第一节已述及） 2.发酵控制（菌种、工艺不同而异） 碳源：糖蜜、葡萄糖、蔗糖等。 氮源：硫酸铵、尿素、氨水、玉米浆、麸皮水解液、豆饼水解液等。 发酵前期：菌体生长期，很少产酸（0-20h） 。 产酸期：至放罐 工艺控制：温度32℃ 、补氨控制pH6.5-7.5、种龄和种量、供氧、维生素B1、生物素、营养盐等。 * 控制氧的重要性：供氧不足，将导致乳酸积累，并可能导致赖氨酸生产受到不可逆抑制。（与细胞膜透性有关） pH控制：补氨 添加某些物质→培养基→菌种生长代谢状态优→可以提高赖氨酸合成量。 第三节 苏氨酸发酵（自学） 第四节 异亮氨酸、亮氨酸发酵（自学） * 思考题： 1.氨基酸的生产方法 2.氨基酸产生菌的选育筛选的关键。 3.筛选氨基酸产生菌的检测方法？请详细叙述。 4.工业生产中某氨基酸高产菌株的筛选，经常选育其它代谢相关氨基酸营养缺陷型突变株。其选育原理是什么（高产原因）？请详细叙述筛选方案。 5.细胞透性改变突变株的选育的目的是什么？如何使产生菌的细胞透性增加？ 6.在氨基酸发酵生产中，一般情况下均使用营养缺陷型的生产菌株。为了菌株在发酵过程中的稳定性，如何防止产生菌发生回复突变？ * 谷氨酸棒状杆菌合成谷氨酸的途径 葡萄糖 中间代谢产物 α—酮戊二酸 谷氨酸 抑制 过多 切断 减少 谷氨酸脱氢酶 NH4+ 原因：生物素是脂肪酸生物合成中酶的辅基，此酶可催化物质反应，最终与合成细胞膜磷脂的主要成分—脂肪酸有关。 ---把生物素的浓度控制在亚适量的情况下，才能分泌大量的谷氨酸。 改变细胞膜的透性 * 黄色短杆菌合成赖氨酸的途径 高丝氨酸脱氢酶 天冬氨酸激酶 天冬氨酸 高丝氨酸 甲硫氨酸 中间产物Ⅰ 中间产物Ⅱ 苏氨酸 赖氨酸 ？ 改变微生物的遗传特性 ---应用营养缺陷型菌株解除反馈调节 高丝氨酸缺陷型菌株不能合成高丝氨酸酶，故不能合成高丝氨酸，也不能合成苏氨酸和甲硫氨酸。在补给适量的高丝氨酸的条件下,就可产生大量的赖氨酸。 ？ 抑制 过量 苏氨酸 赖氨酸 * 影印法 完全培养基 影印接种 基本培养基 营养缺陷型 * 菌丝 过滤法 筛选营养突变株 基本培养基 接入微生物孢子 （含营养突变株） 涂布均匀后培养 长出菌丝体（野生型） 菌丝过滤得 营养突变株 * 限量补充培养法 微量蛋白质的完全培养基上 小菌落是营养缺陷型突变株 * 夹层培养法及结果 小菌落是第二次长起来的（营养缺陷型） * 逐个检出法 涂布 培养 基本培养基上不长菌落 完全培养基上长出菌落 含诱变剂的液体培养基 菌种 营养缺陷型 * （三）基因突变自发性和不对应性的证明 变 量 试 验 涂 布 试 验 影印培养试验 * 大肠杆菌稀释培养物 10 ml 10 ml (培养前先分成50小管) (在同一个大管中作整体培养) 3 7 1 4 4 3 5 抗噬菌体菌落数 抗噬菌体菌落数 变量试验 甲管 乙管 噬菌体起淘汰原始未突变株和鉴别抗噬菌体突变株的作用。 （10mL） （10mL） * 涂布试验 涂布敏感菌5×104个 共12个平板 5×104个菌落 5000个细菌/菌落 喷入T1保温 重新涂布后 喷入T1保温 6个平板共353个菌落 6个平板共28个菌落 噬菌体的加入只起鉴别抗噬菌体的自发突变是否发生。 E.coli * 影印培养 无药 培养基 含药 培养基 影印培养试验 原始敏 感菌种 证明微生物的抗药性突变是在接触药物前自发产生的，且这一突变与相应的药物毫不相干。 E.coli * 人有了