NADH氧化酶例析.ppt

NADH氧化酶 主 讲：*** 班 级：*** 　来源 许多微生物中存在NADH氧化酶，它在调控微生物代谢方面有重要作用。NOX由于其反应物氧不需另行加入，产物结构简单，并且对主产物分离纯化无影响，因此在辅酶NAD＋再生应用中表现了巨大的潜力。 产NOX的细菌可以分为需氧菌及厌氧或兼性厌氧菌两类，前者的产物主要为H2O2 ，且NOX多存在于膜上或胞内；而另一类大部分是乳酸菌，产物主要是H2O，且NOX存在于胞内。 从高级结构来说，乳酸菌与其他来源的NADH氧化酶各异，有包含3、4、6甚至12个亚基的，且辅基数目也不尽相同。 虽然来源不同，但NADH氧化酶分子的氨基酸序列具有普遍类似性，都有NADH结合区域和黄素蛋白FAD结合区域 底物偏好 NADH氧化酶催化反应的底物之一，是反应的电子供体，可以为β-NADH或α-NADH，但对目前发现的NADH氧化酶而言，其最适底物是β-NADH。另外在一些研究中，NADPH也可做为底物被该酶催化氧化。。 NADH氧化酶的另一底物，即电子受体，一般情况下是氧分子，但其他物质也可以成为该酶电子受体，如二氯酚吲哚酚钠（DCIP）、铁氰化物和甲基蓝等。而动力学特性研究表明，O2是该酶的最佳电子受体 反应 FAD是NADH氧化酶的辅基，在酶反应过程中不可缺少。纯化的NADH氧化酶显示出来基本一致的光谱特性，在270，380，450nm处有吸收峰，有黄素蛋白的普遍特性。 性质 NOX 大部分为同源二聚体, 单个亚基相对分子质量一般46~56 kDa, 全酶相对分子质量为92~112 kDa pH 值为5.0~ 9.0. 最适pH 值在6.0~7.5 温度范围为20~ 50。. Cu2+ , Hg2+ , Zn2+等重金属离子能够强烈抑制NADH 氧化酶的酶活, 甚至使其完全失活。 生产 菌种:乳酸菌【泡菜中筛选】 有氧发酵 30 ℃ 150rpm 酶活： NADH在波长340nm之间有特殊吸收峰，而在NADH氧化酶的氧化酶的氧化作用下，其产物NAD+却没有吸收峰。因此，测定在340nm波长处样品的吸光值，通过计算25℃下反应物溶液在340nm处吸光度的减少量，可以得到NADH氧化酶粗酶酶活。酶活定义为25℃时每分钟氧化1μmolNADH所需要的酶量。 作用 清除细胞内氧毒性 介入细胞代谢过程 调节细胞生理和代谢 一种原始的呼吸系统 应用进展----辅酶再生 目前已知氧化还原酶数量超过650种，其中约90种具有商业用途。而在氧化还原酶类中，其中有80%的酶，其辅酶为NADH/NAD＋，另外10%的酶的辅酶是NADPH/NADP＋。所需的这类辅酶在反应中要与反应物以1:1的计量关系进行消耗，但由于它们昂贵的价格使得反应的经济可行性大打折扣。 面对此类困境，国内国外都采用各种方法使辅酶能够在反应中循环使用，发展出的手段包括酶法再生、化学法再生、电化学法再生、光化学法再生等， 但是真正具有工业化应用潜力的。目前还只有酶法再生而利用NADH氧化酶实现NAD＋的再生，由于其操作简单，且以分子氧为氧化剂，产物容易分离，因而有广阔的应用前景，国外在NADH氧化酶实现NAD ＋再生方面，已有很多应用。NADH氧化酶在辅酶再生方面展现出巨大的潜力。 Thanks