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脓汁和粪便标本中病原菌的检测 年级专业：2011级 学号：3110403018 姓名： 林健 1.实验目的： （主要写脓汁和粪便标本中病原菌的检测，另外附加一些辅助实验的目的，如了解并熟悉微生物实验操作方法，实验方法等等） 2.实验器材：（还没有写完） 接种针、接种环、油性笔、打火机、试管架………… 3.实验方法与步骤： 3.1培养基的制备 培养基制备的一般程序： 3.2空气、手指皮肤的细菌学检查 3.3细菌的分离与培养： 采用平板划线分离法，取脓汁标本在普通平板表面划线，取粪便标本在伊红美蓝固体培养基表面划线，使之分散成单个细菌，在37℃培养18～24h ，从而分离出单个菌落。 3.4细菌的纯培养： 取脓汁标本在普通平板上的黄色、白色单菌落，粪便标本在伊红美蓝平板上的紫黑色、淡粉红色单菌落接种在四个斜面培养基，标记，在37℃培养18h。 3.5细菌的形态学检查 3.5.1革兰染色法观察细菌形态 涂片 → 干燥 → 固定→染色。涂片：取一玻片在玻片的左右两侧上加生理盐水3～4ul，2滴，分别取黄色和紫黑菌菌苔少许（1mm小菌落的半量）与左右两侧盐水混匀，涂成1cm2。干燥：在空气中放置至干燥。固定：在酒精灯上来回横穿2到3次对其进行固定。染色：结晶紫 → 初染1分钟→水洗→卢戈碘液→媒染1分钟→水洗→95％乙醇→脱色约20秒钟→水洗稀释→复红→复染1分钟→水洗→吸干,镜检。 3.5.2取另一玻片，取白色和粉红色菌苔，操作与上述同。 3.6细菌的生化试验 3.6.1糖发酵试验 用接种针分别挑少许紫黑和粉红色的细菌接种到葡萄糖发酵管和乳糖发酵管中，在37℃下，培养24小时，观察其产酸产气情况。 3.6.2细菌药物敏感性试验 接种环分别取黄、白、紫黑、粉红色四种菌液3～6ul×2环，各自在四个平板上，作平板密集划线接种细菌（纱窗样）。设计三点，三点之间等边三角距离，点距离平皿边缘约15mm。作标记：青、链、庆。镊子火焰消毒，夹取相应的药物纸片，平贴在已设定的位置上，按压，最后镊子火焰灭菌。37℃18～24小时培养，观察结果。 3.6.3血浆凝固酶试验 取二滴兔血浆置于洁净的玻片上，分别用接种环取白色和黄色菌苔(2～3个菌落的菌量)与血浆研磨混合，涂匀呈云雾状，立即观察结果。 3.6.4半固体接种法 接种针斜面取四种不同颜色的细菌，各自接种进四个半固体培养基，从半固体培养基中心，垂直刺入，到达培养基底部4/5处，再循原来的路线，退出接种针。 在37℃下,培养24小时，观察结果。 3.6.5 痢疾血清玻片凝集反应 取载玻片1张，滴加痢疾血清和生理盐水各15ul，2滴。用接种环挑取少许紫黑色菌落和粉红色菌落，各自与上述混合液液滴混匀，观察结果。 4.结果观察，记录，分析讨论 4.1结果观察 (注：凡是有实验现象的都记录下来，可以放图片，最好和实验记录相对应，有怎样的实验观察就有对应的实验记录) 4.2实验记录（我只提供部分的记录表格，也可以用文字记载，有一些需要大家自己作表格；另外，里面的表格有一些是附表，不是实验记录表） 4.2.1 空气的细菌学检查 采样时间(min) 采样地点 菌落形成单位(CFU) 15 4.2.2手指的细菌学检查 ……………………… 4.2.3 菌落抑菌圈直径(mm) 青霉素 链霉素 庆大霉素 黄色菌落 白色菌落 紫黑菌落 粉红菌落 药敏试验结果分析 青霉素 链霉素 庆大霉素 黄色细菌 白色细菌 紫黑细菌 粉红细菌 注：耐药－，中度敏感±，敏感＋。 4.2.4 常见肠道感染细菌主要生化反应特征 葡萄糖 乳糖 半固体（动力） 大肠埃希菌 ⊕ ⊕ + 福氏志贺菌 + - - 伤寒沙门菌 + - + 霍乱弧菌 + - + 幽门螺杆菌 不分解糖类 + 变形杆菌 ⊕ - + 糖发酵、动力试验结果判断 紫黑菌落 粉红色菌落 葡萄糖 乳糖 半固体 葡萄糖 乳糖 半固体 分解糖产酸不产气+；分解糖产酸又产气⊕；不分解糖- 细菌有鞭毛+；细菌无鞭毛- 肠道杆菌科各菌属生化反应鉴别表 葡萄糖 乳糖 麦芽糖 甘露醇 蔗糖 半固体 埃希菌属 ⊕ ⊕ ⊕ ⊕ √ - 志贺菌属 + √ √ +/- -/+ - 沙门菌属 ⊕/+ - ⊕ ⊕ - - 霍乱弧菌 + - + + + + 变杆菌属 ⊕ - √ - √ + +产酸或阳性， ⊕产酸产气，-阴性， +/-多数阳性， -/+多数阴性， √不确定。 4.2.5血浆凝固酶实验记录