第三章 病毒和亚病毒因子（参考）.pptVIP

E.coil的?噬菌体 一种温和噬菌体 头呈二十面体（55nm），有一可弯曲、中空、非收缩性长尾（B型），头、尾间由“颈”连接。 核心为线状dsDNA，其两端各有一由12个碱基组成的粘性末端“cos”位点。基因组中约一半为“必要基因”，另一半则为“非必要基因”，为良好的基因工程载体。 ①遗传背景清楚；②载有外源基因时，仍可与宿主的核染色体整合并同步复制；③宿主范围狭窄，使用安全；④由于其两端各具“cos”位点，故可组成科斯质粒（粘性质粒或粘粒）；⑤感染率极高（近100%），比一般质粒载体的转化率高出千倍。 讨论 4大类病毒的特征比较 从感染对象、核酸类型、基本形态结构、繁殖方式和实践中的应用等方面比较 病毒的分类： 1、按专性宿主：动物病毒、植物病毒、噬菌体、藻类病毒(噬藻体) 、真菌病毒(噬真菌体) 2、按核酸类型：DNA病毒和RNA病毒 3、病毒粒子的大小 ：小型病毒、中型病毒和大型病毒 4、按病毒结构：裸露病毒和包膜(被膜)病毒 5、按病毒化学成分：真病毒和亚病毒（类病毒、拟病毒和朊病毒） 本次教学回顾与作业 教学回顾 §3-1 病毒 4类病毒及其繁殖方式 增殖、装配、成熟 噬菌体的效价测定 一步生长曲线 溶源性 §3-2 亚病毒 §3-3 病毒与实践 讨论 1、噬菌体的繁殖 吸附(adsorption) 侵入 (penetration) 增殖(复制与生物合成） 成熟（装配）( assembly ) 裂解（释放）( release) 几个概念 烈性噬菌体（virulent phage） ——感染细胞后，能在寄主细胞内短时间完成吸附、侵入、增殖、成熟和裂解5个阶段而实现繁殖，产生大量子代噬菌体并引起细菌裂解的噬菌体。 温和噬菌体（temperate phrage） ——噬菌体感染细胞后，将其核酸整合（插入）到宿主的核DNA上，并且可以随宿主DNA的复制而进行同步复制，在一般情况下，不引起寄主细胞裂解的噬菌体。 裂解性周期（增殖性周期） ——烈性噬菌体所经历的繁殖过程 The Lytic Life Cycle of Lytic Bacteriophages 吸附： 接触→结合→特异性吸附（病毒以其特殊结构与宿主细胞表面的特异受体结合） 噬菌体:尾丝、刺突--------- 细胞壁(脂多糖、脂蛋白、磷壁酸) 荚膜、鞭毛、性毛 动物病毒：刺突、吞噬作用和胞饮作用被动进入 植物病毒：刺突 侵入 病毒或其一部分进入宿主细胞的过程 噬菌体:吸附后尾丝收缩，使尾管碰及细胞壁，这时，尾管端所携带的少量溶菌酶水解细胞上的肽聚糖，然后，尾鞘收缩，把尾管推出并插入细胞壁中，头部的核酸就通过尾管迅速注入宿主细胞中，而将蛋白质外壳留在壁外。 动物病毒：核衣壳侵入，需脱壳 植物病毒：通过表面伤口或昆虫口器插入细胞而侵入 吸附和侵入 The bacteriophage binds to receptors on the bacterial cell wall. The bacteriophage injects its genome into the bacteriums cytoplasm Fig. 2: Penetration Fig. 1: Adsorption 增殖（复制和生物合成） ①核酸复制 增殖（复制和生物合成） ②蛋白质的生物合成 首先是设法利用宿主细胞内原有的RNA聚合酶转录出噬菌体的mRNA 病毒一转录出其mRNA，就由这些mRNA合成出病毒蛋白质(酶、衣壳粒) 早期转录:早期蛋白 次早期转录:次早期蛋白 晚期转录:晚期蛋白 噬菌体的基因组转录和表达具有严格的时序性 装配(成熟) ①偶数噬菌体的装配 指导装配：需要有一些非结构蛋白作指导 成熟 (装配) ②TMV的装配 自体装配：各个组分自发地组装形成病毒粒 完整病毒粒 双层盘 双圈螺旋 裂解(释放) 裂解（Disintegration） : 裸露病毒 裂解 当宿主细胞内的大量子代噬菌体成熟后，由于水解细胞膜的脂肪酶和水解细胞壁的溶菌酶等的作用，促进了细胞的裂解，从而完成了子代噬菌体的释放。 自外裂解 指大量噬菌体吸附在同一宿主细胞表面并释放众多的溶菌酶，最终因外在的原因而导致细胞裂解。 裂解量：平均每一宿主细胞裂解后产生的子代病毒粒子数 出芽（Budding）: 包膜病毒 装配好的核衣壳迁移到宿主细胞膜上对应特异部位，在出芽穿过细胞膜的过程中裹上包膜，释放. 植物病毒的繁殖过程 2、噬菌体效价的测定 效价(滴度,Titre) —表示每毫升试样中所含有的具有侵染性的病毒粒子数。 噬菌体效价 —或噬菌斑形成单位（plaque-forming unit,pfu）或感染中心数（infective