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实验室注意事项 安静有序,不要大声喧哗 禁止在实验室喝水吃东西 时刻警惕生物污染 生物污染垃圾放入黄色塑料袋 实验完毕将器材放入指定收集位置 实验结束将自己的实验台打扫干净 每组组长安排2人值日 不得迟到早退,实习过程必须穿白大衣 Content 血液标本采集、涂片、染色 全血细胞计数(CBC)、三分类 显微镜下白细胞分类 1.血液标本采集Blood specimen collection 熟悉毛细血管与静脉穿刺采血方法 掌握真空采血管的种类与正确使用 正确分析检验结果与血液标本采集的关系 血标本采集器材 毛细血管采血 一次性采血针 一次性微量吸管 消毒棉签 安尔碘皮肤消毒剂 静脉穿刺采血 一次性采血针 持针器 止血带 枕垫 消毒棉签 安尔碘皮肤消毒剂 真空采血管 真空采血管 Vacuum tube 毛细血管采血Specimen collection by capillary puncture 实质是微动脉、微静脉和毛细血管的混合血,含有细胞间质和细胞内液。 用血量少,适用于婴儿、大面积烧伤、需频繁采血进行检查的病例。 多选择手指或耳垂部位采血。 穿刺必须够深,使血液自行流出或仅轻施压力即可流出。 微量吸管的容量必须准确,内腔一定要干燥,否则会影响吸血量和导致溶血。 静脉穿刺采血Specimen collection by venipuncture 静脉采血法适用于用血量较多的检查项目。 静脉血标本代表性大,各项成分相对稳定,可反映病人整体状态,可广泛用于各项检查。 如果发生晕针,立即拔针,平卧休息。 体表浅静脉几乎都可以作为采血部位,通常采用肘部静脉。 注意受检者采血的体位、情绪、运动状态、使用某些药物等因素。 真空采血过程无血液外溢和污染,运送方便。封闭状态,无需容器间转移,减少溶血,避免环境暴露的影响。 2. 全血细胞计数(CBC) 了解血液分析仪的各项参数、参考值、操作方法与结果分析 。 熟悉血细胞计数板的使用方法。 掌握血涂片的制备和瑞特-吉姆萨染色。 掌握显微镜法外周血分类计数的方法、各种WBC的正常形态。 血液分析仪Hematology Analyer 两大功能 细胞计数功能 细胞分类功能 原理 电阻抗法 光散射法 Sysmex KX-21 :三分群 Beckman Coulter STKS :五分类 电阻抗原理Principle of electrical impedance Coulter principle 根据血细胞相对非导电的性质,悬浮在电解质溶液中的血细胞颗粒,在通过计数小孔时可引起电阻的变化为基础,对血细胞进行计数和体积测定。 电阻抗原理计数Principle of electrical impedance 将等渗电解质溶液稀释的细胞悬液置入不导电的容器中,将小孔管(transducer)插进细胞悬液中。 小孔管内充满电解质溶液,并有一个内电极,小孔管的外侧细胞悬液中有一个外电极。 接通电源后,位于小孔两侧的电极产生稳定的电流。 当细胞通过小孔时,瞬间引起了电压变化而出现一个脉冲信号。 脉冲大小反映细胞体积大小,脉冲数量代表细胞数量。 Sysmex KX-21 电阻抗原理分类(三分群) 不同体积的白细胞通过小孔时产生的脉冲大小有明显差异,根据这些脉冲大小,可对白细胞进行分群。 小细胞区:主要是淋巴细胞 单个核细胞区(也 称作中间细胞) :主要包括单核细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞 大细胞区:主要是中性粒细胞 容量、电导、光散射检测原理(VCS) Volume conductivity light scantter Volume:应用电阻抗原理测量细胞体积 Conductivity:根据细胞壁能产生高频电流的性能,采用高频电磁探针,测量细胞内部结构,即以细胞核和细胞质的比例、细胞内颗粒的大小和密度,来辨别体积相同,但性质不同的两个细胞群体。 Light scatter:来自激光的单色光直接扫描进入计数敏感区的每一个细胞,根据细胞产生的不同角度的散射光(10~70),可提供细胞形态、核结构等光散射信息,并能鉴别细胞颗粒的构型和质量(粗颗粒的光散射比细颗粒更强);光散射可区别粒细胞的类型。 Beckman Coulter STKS 血涂片制备Preparing blood smear Wright-Giemsa solution ingredients 酸性染料伊红(钠盐)和碱性染料美蓝(氯盐) 伊红钠盐有色部分为阴离子,可与带正电荷的物质结合。 氯化美蓝有色部分为阳离子,可与带负电荷的物质结合。 二者溶解在甲醇中形成可溶性的伊红化美蓝溶液,既可以固定细胞又利于细胞蛋白质选择性地吸附其中有色离子而着色。 氯化美蓝放置久后可氧化为天青,对细胞核染色加强,添上更
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