植物油脂-卵磷脂中磷脂含量测定 高效液相色谱蒸发光散射检测法.docVIP

ICS目 次 1 范围 1 2 规范性引用文件 1 3 术语和定义 1 4 原理 1 5 试剂 1 6 设备 2 7 扦样 2 8 测试样品的制备 2 9 步骤 2 10 校准和结果表达 4 11 方法精密度 4 12 试验报告 4 附录A（资料性附录）高效液相色谱图 5 附录B（资料性附录）联合实验室测试结果 6 参考文献 11 前 言 本标准等同采用ISO 11701:2OO9(E)《植物油脂-卵磷脂中磷脂含量的测定》（英文版）。 为便于使用，本标准做了下列编辑性修改： ——删除ISO 11701的前言； ——“本国际标准”一词改为“本标准”； ——用小数点“.”代替ISO 11701中作为小数点的“,”； ——用“GB/T 15687-2008 油脂试样制备”代替“ISO 661:1998, Animal and vegetable fats and oils—Preparation of test sample”； ——用“GB/T 5524-2008 动植物油脂 扦样”代替“ISO 5555:2001, Animal and vegetable fats and oils—Sampling” ——由于语言文字不同，本标准的页码与ISO 11701-2009原文不同。 本标准由全国粮油标准化技术委员会提出并归口。 本标准起草单位： 本标准起草人： 植物油脂 卵磷脂中磷脂含量测定 高效液相色谱蒸发光散射检测法 范围 本标准规定了采用高效液相色谱定量测定磷脂含量的方法，本方法使用二醇柱和蒸发光散射检测器。 本标准适用于粗制卵磷脂、无油卵磷脂和植物油脂中提取的卵磷脂。 由于溶血磷脂酰乙醇胺、溶血磷脂酰肌醇、溶血磷脂酸分离不完全，本标准不适用于动物、反刍动物卵磷脂和酶解卵磷脂。 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB/T 15687油脂试样制备（GB/T 15687-2008, idt ISO 661:2003） GB/T 5524 动植物油脂 扦样（GB/T 5524-2008,idt ISO 5555:2001） 术语和定义 为便于使用，下列术语和定义适用于本标准。 单组分磷脂含量 按照本标准规定的方法测得的N-酰基-磷脂酰乙醇胺（N-acyl-PE）、磷脂酰胆碱(PC)、磷脂酰乙醇胺（PE）、磷脂酰肌醇（PI）、磷脂酸（PA）、溶血磷脂酰胆碱（LPC）的质量分数。 注 含量以g/100g表示，相当于质量百分数。 原理 单组分磷脂通过高效液相色谱二醇柱分离后，蒸发光散射检测器检测。使用有证标准物质进行定量。 试剂 警告-应当严格遵循有毒物质使用规程。采取有效措施保证组织、个人安全。 以下所用试剂，除特别注明外，仅使用分析纯试剂 水，色谱纯 正己烷，色谱纯 异丙醇，色谱纯 乙酸，质量分数≥99.8% 三乙胺 混合溶剂：混合溶剂由80mL正己烷(5.2)和20mL异丙醇(5.3)(正己烷体积分数φ=80mL/100mL，异丙醇体积分数φ=20mL/100mL)组成，用于溶解标准品和样品。 标准品(外标)ILPS-LE011)，混合大豆磷脂标准物质，其中N-acyl-PE、PA、PE、PC、PI、LPC的准确含量已精确测定。 高效液相色谱流动相 A相 将814.2mL正己烷(5.2)、170.0mL异丙醇(5.3)、15mL乙酸(5.4)和0.8mL三乙胺(5.5)混合。（其中正己烷体积分数φ=81.42mL/100mL,异丙醇体积分数φ=17.00 mL /100mL, 乙酸体积分数φ=1.5mL/100mL, 三乙胺体积分数φ=0.08mL/100mL） 为得到组成较稳定的洗脱液，应考虑到溶剂密度，建议将所有溶剂称重。若配制2.5 L混合溶剂：称取1341.4g正己烷、331.5g异丙醇、39.4g乙酸和1.45g(2.0mL)三乙胺。 B相 将844.2mL异丙醇(5.3)、140mL水(5.1)、15.0mL乙酸(5.4)和0.8mL三乙胺(5.5)混合。（其中异丙醇体积分数φ=84.42mL/100mL，水体积分数φ=14.00mL/100mL，乙酸体积分数φ=1.50mL/100mL，三乙胺体积分数φ=0.08mL/100mL） 为得到组成较稳定的洗脱液，应考虑到溶剂密度，建议将所有溶剂称重。若配置2.5L混合溶剂：称取1646.2g异丙醇、350.0g水、39.4g乙酸和1.45g(2.0mL)三乙胺。 设备 分析天平，分度值0.0001g 高效液相