蛋白质浓度测定方法概述.pptVIP

测量后的计算方法 使用 一 实验结果 　　　求出待测蛋白质溶液的光密度后，从标准曲线上查出其蛋白质浓度，按稀释倍数求出每毫升蛋白质溶液的蛋白质含量。 讨论 每种方法的适用范围 每种方法的影响因素 还有无其他方法 * 四种古老的经典方法： 定氮法 双缩尿法（Biuret法） Folin－酚试剂法（Lowry法） 紫外吸收法 新的测定法： 考马斯亮蓝法（Bradford法） 更新的测定方法： BCA法 分光光度计的使用 原理 光线的本质是电磁波的一种，有不同的波长。肉眼可见的彩色光称为可见光，波长范围在400～750nm：小于400nm的光线称为紫外光；大于750nm的光线称为红外光。 当光线通过透明溶液介质时，其辐射的波长有一部分被吸收，一部分透过、因此光线射出溶液之后，部分光波减少，这种光波的吸收和透过可用于某些物质的定性定量分析。 依据Lambert-Beer（朗伯－比尔）定律，一束单色光通过溶液后，光波被吸收一部分，其吸收多少与溶液中溶质的浓度和溶液厚度成正比。 当入射光、吸收系数K和溶液的光径长度L不变时，吸光度A与溶液的浓度C成正比。 　　具体测量时， 补充知识 ７２１型可见分光光度计 紫外分光光度计 微量凯氏（Kjeldahl）定氮法 原理 样品与浓硫酸共热。含氮有机物即分解产生氨（消化），氨又与硫酸作用，变成硫酸氨。经强碱碱化使之分解放出氨，借蒸汽将氨蒸至酸液中