细胞凋亡与疾病8J2014.pptVIP

2002年诺贝尔生理与医学奖获得者 ⑴核酸内切酶(DNase)的激活与DNA的片段化： DNase：凋亡蛋白酶激活的DNA酶（CAD）被激活后，（caspase 水解ICAD后，ICAD与CAD 分离，进入胞核。）先将DNA水解为50-300kb片段，然后，在染色质中的基本结构单位核小体之间的连接区将DNA内切成180bp倍数的核苷酸片段[DNA的片段化]，呈梯状电泳现象。Ca2+/Mg2+可增强DNase活性，Zn2+可抑制DNase活性。 Procaspase的结构特点 procaspase可被切割为大约20kD和10kD的两个大小亚基及一个NH2末端结构域。各结构域之间由天冬氨酸水解酶识别结构分隔。 (1)NH2末端结构域的序列和长度高度变异，这可能与caspase所表现的不同功能及活化机制有关。 (2)所有procaspase的各结构域之间具有相同的分割区域，即它有自身活化或被具有相同结构特点的酶活化。 procaspase被激活的过程相似 ，即通过功能区间特异位点的蛋白酶解，继而以大小亚单位形式形成异源二聚体，进一步形成四聚体（caspase活化）。 依据caspases结构和功能的不同又可分为三大类： ①启动子caspase：包括具有长N端前区的caspase-2,8,9,10，能对凋亡信号作出反应，启动细胞的自杀过程； 其中8、10的N端结构域含死亡效应子区(DED)，而9含的是类似DED的caspase募集功能域(CARD)。 ②效应子caspase：包括具有短N端前区的caspase-3,6,7,是细胞凋亡的执行者，能水解特定蛋白底物。 ③与炎症有关的caspase：1,4,5,11,12,13,14。 Caspases的活化与级联反应 Caspase的作用： ①灭活细胞凋亡的抑制物(ICAD；Bcl-2); ②水解蛋白质结构，导致细胞解体，形成凋亡小体：Lamina(核纤层蛋白)，被Caspase破坏后，核随即裂解。 ③分解与细胞骨架构成相关的蛋白：PAK2可使细胞结构重组并凋亡。瓦解核结构成核碎片。 ④参与凋亡级联反应，如：启动子caspase-9可使caspase-3前体水解→效应子caspase-3。 ⑶钙离子的动员：胞内Ca2+增多，激活钙依赖性的酶如核酸内切酶、钙蛋白酶、谷氨酰胺转移酶，分别可导致DNA降解和染色质凝集、细胞骨架紊乱与细胞皱缩，以及胞质蛋白质交联（如γ谷氨酰与ε赖氨酸基交联）、维持凋亡小体完整、防止细胞内涵物外溢等； 病理性凋亡信号 诱导性的因素： 微生物 细菌、病毒 理化因素 射线、化学毒物、氧自由基 化疗药物 多途径诱导癌细胞凋亡 免疫性因素 CTL分泌粒酶致靶细胞凋亡 抑制性的因素： 化学促癌物 某些病毒（EB、乳头状瘤） 线粒体介导凋亡的机制 Cyto-C＋Apaf-1→procaspase-9↑→caspase-9↑ AIF→Cyto-C↑→凋亡的信号↑→核酸内切酶↑↑ Smac/Diablo→↓凋亡抑制蛋白 Bcl-2抗凋亡的主要机制: ①直接抗氧化作用； ②抑制线粒体释放促凋亡的蛋白质:Cyt.c、AIF ③抑制促凋亡调节蛋白Bax、Bak的作用； ④抑制caspase的激活：Bcl-2能够结合和灭活Apaf-1，阻断对caspase-9活化；也能特异地结合Cyt.c 。 ⑤维持细胞钙稳态。 Bcl-2作用机制示意图： 细胞凋亡的生理意义： 1、确保正常生长、发育 胚胎发育过程中，指（趾）间组织通过细胞凋亡形成指（趾）间隙。 2、维持内环境稳定 受损、突变、衰老的细胞以及针对自身抗原的T细胞、癌前病变细胞等大多通过细胞凋亡清除。 3、防御功能 被病毒感染的细胞通过细胞凋亡、使DNA降解，阻止病毒复制。 肿瘤细胞凋亡不足的可能机制 调控凋亡相关信号的异常：包括促凋亡信号（如TNF和Fas↓）和抑凋亡信号（如EGF↑）的异常。(乳腺癌图) 诱导凋亡相关信号转导通路的障碍：包括死亡受体和线粒体介导的相关信号转导通路异常。乳腺癌组织中Fas受体表达降低；乳腺癌组织中Fas与癌细胞凋亡率呈正相关。 实施凋亡相关基因表达的异常：包括抑凋亡基因和促凋亡基因的异常，尤其是Bcl-2和p53。 mtp53↑则肿瘤的发生率增高。 执行凋亡相关酶活性的异常: 包括caspase和核酸内切酶等活性异常。 Caspase活性下降，则瘤细胞凋亡明显下降。 (二)病毒感染性疾病 正常时宿主可利用细胞凋亡介导感染病毒的细胞自杀。但病毒及其产物抗凋亡的可能机制有： 灭活P53：腺病毒的基因表达EIB55kD蛋白和EIB19kD蛋白都可结合P53； 高表