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利用Lightcanner进行高分辨率溶解曲线分析时一种转板器的制作及其
利用Lightcanner进行高分辨率溶解曲线分析时一种转板器的制作及其使用方法
声明:,本方法由Along独立创制,如有雷同纯属巧合
导言
出于节省试验成本需要对lightscanner匹配的全裙边PCR板进行反复利用时或者实验室缺乏匹配全裙边PCR板PCR仪的情况下,需要在PCR扩增完后把普通PCR板(或8/12连管)PCR产物转移到全裙边板子上,如果用排枪(或单枪)吸取,如果是大规模筛选,个人觉得比较麻烦,而且会存在少量残留,如何快速高效转移呢?笔者找到了一个比较简便的方法,下面进行简单介绍。
配套材料要求
普通PCR板:管口要凸出,与板子齐平的不行。
匹配Lightscanner的全裙边板:
/zh-cn/sku/hsp9665-hard-shell-low-profile-thin-wall-96-well-skirted-pcr-plates
转板器制作及使用
96孔微孔板的选择(微孔板也叫细胞培养板、酶标板等)
选择特定类型的V底(U底也可接受)96孔微孔板(不是每种品牌都可以使用,不同品牌间在构造上略存差异,这些差异有可能导致不能改造成转板器),材料最好是PP(聚丙烯,就是普通PCR管的那种材质),因为其比较柔软一些,易于打孔而不破裂(市面上的微孔板多是PS即聚苯乙烯材料的,本人没有试过,因其比较脆,恐不好打孔)。本人验证Eppendorf的V底(U底也可接受)96孔微孔板(Eppendorf货号0030 601.300)与全裙边板非常匹配,只要微修打孔即可使用,下面就以此种微孔板为例介绍制作转板器的方法。
工具
制作方法
1、修支脚(目的是使管底直接搭在全裙边板上,而不是悬空)
2、打孔(烫孔)
用夹钳夹住尖底螺丝钉(越尖越好)在酒精灯上烧热后,从微孔板底部,对准管底中央尖端烫开一小孔,一次烧热可以烫三四个孔,所有孔烫完后用手抠掉那些粗糙的塑料结痂(不需要抠得多彻底)。下图是修支脚及打孔之后的效果
3、检验效果
有可能由于孔不平滑使离心后液体有少部分残留,因此必须检查是否存在液体残留现象,按下面的使用方法,用少量纯水试验。试验没问题就可以用样品正式进行。
使用方法
把PCR版扣在微孔板孔里,然后把微孔板搭在全裙边板上离心即可,若担心离心时滑落(一般不会)则捆个橡皮筋即可。2000rpm,30s,ok!
这种管口的可以
这种管口的不行
用小刀把图示部位的所有支撑横挡支脚全部去除,修到突出的平面齐平即可,不需要修到底部
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