医学生物化学实验指导-上海交通大学医学院精品课程.doc

第一章 实验基本操作 一、要求 1．熟悉实验室规则及常用生化仪器 2．清点洗刷实验用具。 3．掌握各种仪器的正规操作及维护 二、常用生化仪器 烧杯 试管 刻度吸量管 离心管 滴管 搅棒 枪式移液器及其配适吸头 混匀器 恒温水浴箱 离心机 分光光度计， 电泳仪 点收仪器； 根据仪器清单，逐项查点是否完好(如有缺损向教师声明及时补充更换)。 本套仪器由本人使用保管至全部实验课程结束。 三、基本操作 1．玻璃仪器的洗涤 (1)洗涤液： ①洗洁精，肥皂水，洗衣粉。 ②玻璃仪器专用洗涤液：主要成份为中性稀氯氧化剂，上海日化研究所出品 (2)洗涤的要求与步骤： 要求：洁净的玻璃器皿表面应不挂任何水滴。 步骤： 不净的器皿 洗衣粉或肥皂水刷洗 自来水冲净 达到要求？ 是 浸入洗液(数小时至过夜) 自来水冲净 蒸馏水涮洗2—3次 (其目的是去除自来水中的杂质，故应少量多次，全面充分) 烤干或晾干、备用 对使用过的仪器应养成及时清洗的习惯，特别是血液分析时用以吸取血液样本的吸管，用过后应当立即用水将所沾的血液冲去，否则放置过久，血液干燥硬结，就很不容易清除。 (3)玻璃仪器的干燥 一般的玻璃仪器均可洗净后倒置架上，让其水分蒸发自然干燥，如需迅速干燥者应按仪器的不同类型按下述不同方法处理： ①试管、离心管、烧杯、烧瓶等普通玻璃器皿可置烤箱中100—105℃烘烤 ②少量仪器如需急用也可在电炉上或酒精灯上烘烤。烘烤时应将器皿时时转动，务使受热缓慢且均匀，并将管口(或杯口)倾斜向下，以便水蒸气冷凝成水滴，顺口流出，不致使水滴接触烘热了的器壁而使仪器爆裂。 ③使用电吹风干燥一般玻璃仪器也很便利常用。 ④下列玻璃仪器应避免烘烤：吸管：容易造成器壁变形而致容量不准。 比色杯：易在烘烤时发生破裂。 2．移液操作 (1)吸量管的使用 ①吸量管的选择： 在一次完成转移的前提下，应选用容量较小的吸量管。 ·对于同一次实验中同一种试剂的移取，应选用同一支吸量管 ②操作(见图1—1) ·用洗耳球将液体吸至超过标线 ·移开洗耳球，迅速用食指压紧管口 ·必要时将管尖端外围拭净 ·调液面至标线 ·放开食指，使液体流入容器 ·将最后液滴沿器壁而下或吹出 ③读数(见图1—2) ·吸量管保持垂直 ·视线与液面应水平 ·管中液面与刻度线应呈切线 注：对于刻度由上至下的吸量管应尽量使用上端刻度管尖残液是否需吹出，看清标记。 弯 (2)枪式移液器的使用 ①抢式移液器的结构(见图3) 1. 液体吸放钮 2．体积选取钮 3. 体积、显示 4．枪头排放钮 5. 枪头排放器 6．枪头接嘴 其内部柱塞分2段行程，第1档为吸液，第2档为放液，手感十分清楚。 ②操作(见图1—4) ·调体积选取钮至所需值 ·套上枪头，旋紧 ·垂直持握枪式移液器外壳，按下大拇指至第1档 ·将枪头插入溶液，徐徐松开大拇指，使其复原 ·排放时，重新将大拇指按下，至第1档后，继续按至第2档以排空 注：移取过程中应控制速度，力度 如需移取另一样品，按枪头排放钮，更换枪头 3．混匀 (1)旋转法：手持容器，使溶液作离心旋转 (2)指弹法：一手执试管上端，另一手轻弹试管下部，：使其中液体作涡旋运动。 (3)搅动法：使用玻璃棒搅边；多用于溶解烧杯中的固体。 (4)混匀器法：将试管置于混匀器的振动盘上，逐渐用力下压，使内容物旋转。 (5)倒转混匀：适用于具塞的容器，如容量瓶、具塞量筒及具塞离心管等。操作时，将容器反复倒转。试管内的液量太多，也可利用倒转混匀法，外面包以玻璃纸塞住管口，然后用手指按住橡皮塞将试管反复倒转，溶液即可充分混匀。 (6)吸管混匀法：用吸管将溶液反复吸吹数次，以达到混匀的目的。 4．加热与保温 (1)加热 (2)保温 ①使用恒温水浴箱，调节温度设定钮至需要的温度。 ②水浴箱中水要足量。 ③实验过程中应随时监测温度，并及时调节。 5．离心 (1)离心沉淀法： 当颗粒小而不均一，沉淀粘稠或容积小又需精确定量时，往往采用离心沉降法。 (2)离心前检查： ①取出所有套管，起动空载的离心机，看是否转动平稳。 ②检查套管有无软垫，是否完好，内部有无异物。 ③离心管与套管是否匹配。 (3)平衡： 将一对离心管放入套管，置于天平两侧，用滴管较轻一侧的离心管与套管之间加水至两侧平衡(离心管及其内溶液量不能差别过大) (4)离心： 将等重的两管置于离心机中的对称位置，调转速调节钮，逐渐增加转速至所需值，计时，离心结束后，将套管中的水倒净，所有套管放回离心机中。 四、血液样品的制备： 1．采取