【2017年整理】呼吸道九联检操作规程-SOP.doc

广州市医院检验科 免疫室（SOP）文件撰 写 人： 审 核 人： 批 准 人： 批准日期： 2011年 8月8日启用日期： 2011年 8月8日二零一一年八月八日制文件编号: HDHY-MYJY-P001-2011版 序：第 2 版 第 1 次修订生效日期: 2011年8月8日责任科室: 免疫室页 码: 第1页 共 1页批 准 页根据《临床检验操作规程》(2006年,第三版)，九项呼吸道病原体IgM抗体检测试剂盒使用说明书；免疫检验有关试剂盒、质控品的使用操作说明书；《消毒技术规范》以及医院内部有关管理制度、生物安全制度的规定和要求，临床免疫检验操作规程文件NO.2版经实际运行，现予以批准通过，于 2011年 8月8日起生效并开始实施。免疫室和检验科有关工作人员必须认真学习，严格遵照执行。（NO.2版依据检验技术和我科工作发展及管理工作的需求进行的补充完善和改进另行通知）。任何个人不得更改，实际工作中如发现不妥之处，请按程序以文字形式向审核人汇报；在未经批准人同意/批准新文件之前，仍执行此文。 2011年8月8日编写人修改内容及修改人批准人生效日期文件编号: HDHY-MYJY-P003-2011版 序：第 2 版 第 1 次修订生效日期: 2011年8月8日责任科室: 免疫室页 码: 第1页 共 2页呼吸道九联检操作规程项目中英文名称：九项呼吸道感染病原体IgM抗体检测试剂盒（间接免疫荧光法）2.实验原理与方法：2.1 原理： 间接免疫荧光法（IFA）是基于待测样本中的抗体与吸附在载玻片上的抗原发生的反应。样本中存在的特异性抗体和抗原反应，未与抗原结合的免疫球蛋白在洗涤步骤中除去。在下一步骤中，抗原-抗体复合物与荧光素标记的抗人球蛋白反应。用免疫荧光显微镜观察结果。2.2 方法：间接免疫荧光法3.标本的要求： 需由专业人员无菌静脉穿刺采集血液。使用消毒或无菌技术能保持样本的完整性。血清样本采集后如不在8小时内检测应2~8 oC冷藏，如7天内不检测，则应冷冻（-20oC）保存。不要反复冻融以防止免疫球蛋白滴度降低，特别是IgM。不要使用高血脂或污染的血清。若样本中含有微粒要离心使之澄清。4.仪器：荧光显微镜5.试剂厂家及名称：郑州安图绿科生物工程有限公司6.操作步骤：1. 使用前，将所有试剂平衡至室温。载玻片平衡至室温后再打开。2. 样本的稀释：按1:1比例稀释血清样本，即25μL血清加入25μL PBS2中。阴阳性对照3 4不需要稀释。3. 用抗人IgG吸附剂7 处理稀释后的血清：将30μL稀释后的血清加入150μL吸附剂中，彻底混匀。阴阳性对照3 和4 不需吸附剂处理。处理后的血清要离心10-15分钟除去沉淀，以防干扰检测。4. 在载玻片1 的每孔中加15μL吸附剂处理过的血清（一份样本对应一个载玻片）。在一个载玻片的每孔中加入15μL不稀释的阳性对照3，在另一个载玻片的每孔中加入15μL不稀释的阴性对照4。5. 将载玻片放入湿盒中，37℃温育90分钟。6. 用PBS 2 的缓慢水流冲洗载玻片1（避免直接冲入孔内）后，浸泡在PBS中并放置在水平摇床上轻轻摇动10分钟。再用蒸馏水缓慢水流冲洗（避免直接冲入孔内）。7. 载玻片1 自然晾干。8. 每孔加入15μL抗人IgM FITC结合物溶液5M（不需稀释）。9. 将载玻片放入湿盒，37℃温育30分钟。10. 重复6和7的洗涤步骤。11. 加几小滴封闭介质6，小心盖上盖玻片。12. 尽快用荧光显微镜在400倍放大率下观察结果。如果不能立即观察，可将其避光放置于2-8oC不超过24小时。编写人修改内容及修改人批准人生效日期文件编号: HDHY-MYJY-P004-2011版 序：第 2 版 第 1 次修订生效日期: 2011年8月8日责任科室: 免疫室页 码: 第2页 共 2页* 简明操作程序（将风干改成晾干）编写人修改内容及修改人批准人生效日期广州市胸科医院检验科操作标准程序文件文件编号: HDHY-MYJY-P007-2011版 序：第 2 版 第 1 次修订生效日期: 2011年8月8日责任科室: 免疫室页 码: 第1页 共 2页* 有效性判断每一次试验都应设立阳性和阴性对照，以确认试验和试剂盒的有效性。观察到的荧光模式应为：阳性对照：腺病毒、流感病毒、呼吸道合胞病毒或副流感病毒对阳性质控的1-15%细胞出现苹果绿细胞核、胞浆或胞膜荧光（在副流感病毒和呼吸道合胞病毒中能同时观察到着色的合胞）；军团菌、衣原体或立克次体中所有的细菌呈现出苹果绿荧光；支原体对阳性质控在细胞外围呈现苹果绿色荧光。阴性对照：军团菌、肺炎衣原体和立克次体无荧光，支原体、腺病毒、甲型和乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒和副流感