（新）5.3黄酮.pptVIP

* 在木部坚硬组织中，多以游离苷元形式存在； 根据化合物极性不同，溶解性不同，采用不同溶剂提取。 黄酮类化合物在花、叶、果等组织中，多以苷的形式存在； 一、提取 5.3 黄酮化合物的提取与分离 * 苷元 多用CHCl3、Et2O、EtOAc等极性较小溶剂提取 对于多OCH3化的成分，用石油醚提取； 对于极性大的成分，如查耳酮、橙酮、双黄酮、羟基黄酮等，用EtOAc、EtOH、 MeOH 等溶剂提取。 苷类，水或热水提取，（多糖苷在热水中溶解度较大，在冷水中溶解度较小）；也可用EtOH、MeOH、EtOAc提取。 含羟基的苷或苷元，可用碱水提取。 提取花青素类可加入少量酸，但一般黄酮类化合物则应避免。 注意：苷类提取要防止酶解。 * （一）溶剂提取法 1、乙醇或甲醇提取 浓缩提取液得浸膏，加水分散，用乙醚萃取得苷元（游离黄酮），再用乙酸乙酯或正丁醇萃取得黄酮苷。 2、热水提取 仅用于提取黄酮苷类，冷后苷类沉淀析出。 * 3、碱提酸沉法 常用碱水：石灰水，Na2CO3，稀NaOH， 碱性稀醇：5% NaOH的50%乙醇 酸沉：盐酸 注意：酸碱浓度不宜过高（碱性过强，破坏黄酮母核；酸性过强，生成烊盐，影响产率）。 石灰水：可除去鞣质，果胶，粘液质等有利于纯化。但浸出效果不及NaOH ，且有些黄酮可与钙结合成不溶性沉淀。 稀NaOH：浸出效率高，但杂质也多。 * (二)、粗提物的精制处理 1．溶剂萃取法去杂 石油醚：除去叶绿素、胡罗卜素等脂溶性色素 水溶醇沉：除去蛋白质、多糖、大分子水溶性物质 逆流分配：水-乙酸乙酯，正丁醇-石油醚 在萃取除杂的同时，可使不同极性或极性相差较大者分离，如极性不同的苷和苷元，极性苷元和非极性苷元。 * 2．炭粉吸附法 适用于苷类的精制工作。 植物的甲醇提取液加活性炭至吸附完全，过滤得吸附苷的活性炭粉末。 依次用沸水、沸甲醇、7%酚/水、15%酚/醇洗脱，分步收集、检查、合并。 大部分苷类可用7%酚/水洗下，经减压浓缩至小体积，乙醚除酚，余下水层经减压浓缩得较纯黄酮苷。 * 3．离子交换法 用阳离子交换树脂从水提液中吸附黄酮类化合物，与不被吸附的杂质分离，再用甲醇将黄酮类化合物洗脱。 RSO3-H+ ArOH（黄酮） 无法交换，故实际上树脂仅起到吸附作用。 * 分离依据：极性差异、酸性强弱、分子大小和特殊结构。 （一）系统溶剂法 自浸膏中先用乙醚萃取苷元，再用乙酸乙酯萃取苷，最后用正丁醇萃取极性较大的苷。 二、分离 * 梯度pH萃取法适合于酸性强弱不同的黄酮苷元的分离。 根据黄酮苷元酚羟基数目及位置不同其酸性强弱也不同的性质，可以将混合物溶于有机溶剂（如乙醚）后， 依次用 5%NaHCO3、5%Na2CO3、0.2%NaOH、4%NaOH溶液萃取，来达到分离的目的。 一般规律是具7，4’-二羟基者可溶于NaHCO3溶液，具7或4’-羟基者可溶于Na2CO3溶液，具一般酚羟基者可溶于0.2%NaOH溶液，具5-羟基者只能溶于4%NaOH溶液。 （二）pH梯度萃取法 * ( 三)根据分子中某些特定官能团性质进行分离 有邻二酚羟基的黄酮可被醋酸铅沉淀，不具有邻二酚羟基的黄酮可被碱式醋酸铅沉淀，据此可将两类成分分离。 具有邻二酚羟基的黄酮可与硼酸络合，生成物易溶于水，借此可与不具上述结构的黄酮类化合物分离。 * （四）柱层析法 1、聚酰胺柱层析 （1）吸附原理： 聚酰胺分子中酰胺基与黄酮类化合物分子上的酚羟基形成氢键缔合而产生吸附作用。 主要有聚己内酰胺型(Perlon)、六次甲基二胺已二酸盐(Nylon)型、聚乙烯吡咯烷酮(Polyclar)型三种。 * 溶剂在聚酰胺柱上洗脱能力由弱至强依次为： 水，甲醇，丙酮，氢氧化钠水溶液，甲酰胺，二甲基甲酰胺，脲素水溶液。 常用洗脱剂:水—乙醇。 其原理是酰胺羰基与黄酮酚羟基形成氢键缔合而吸附，吸附能力与酚羟基多少、位置及氢键缔合力大小有关。 * （2）吸附规律： A：与酚羟基的数目有关，酚羟基数目越多，吸附力越强。 B：与酚羟基的位置有关，如果酚羟基所处的位置易于形成分子内氢键，则吸附力减弱。 C：分子内芳香化程度越高，共轭双键越多，则吸附力越强。 查耳酮二氢黄酮；黄酮二氢黄酮 D：不同类型黄酮被吸附的强弱顺序为： 黄酮醇黄酮二氢黄酮异黄酮。 E：苷元相同时，苷被吸附的强弱顺序为： 苷元单糖苷双糖苷叁糖苷 * F：与溶剂介质有关 由弱到强：水甲醇或乙醇丙酮稀氢氧化钠或氨水甲酰胺二甲酰胺尿素水溶液。 注意：聚酰胺层析常常存在流速慢及低分子杂质混入的问题。 可通过预先过筛除去细粉或与硅