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遺传学实验指导1
遗传学实验指导
实验1 细胞有丝分裂与减数分裂
实验1.1 植物根尖细胞有丝分裂过程的制片与观察
目的要求
学习和掌握植物细胞有丝分裂制片技术;观察植物细胞有丝分裂过程中染色体的形态特
征及染色体的动态行为变化。
实验原理
有丝分裂是植物体细胞进行的一种主要分裂方式。有丝分裂的目的是增加细胞的数量而使植物有机体不断生长。在有丝分裂过程中,细胞核内的遗传物质能准确地进行复制,然后能有规律地均匀地分配到两个子细胞中去。植物有丝分裂主要在根尖、节间、茎的生长点、芽及其它分生组织里进行。将生长旺盛的植物分生组织经取材、固定、解离、染色、压片等处理即可以观察到细胞内的有丝分裂图象。如若需要进行染色体计数,则需进行前处理,即取材之后采用物理的或化学的方法,阻止细胞分裂过程中纺锤体的形成,使细胞分裂停止在中期。这时,染色体不排到赤道板上,而是散在整个细胞质中。这十分便于对染色体的形态、数目进行观察。
试剂和器材
1材料
均可以大蒜(Allium sativum 染色体数目 2n=16)、玉米(Zea mays 染色体数目2n=20)、洋葱(Allium cepa 染色体数目2n=16)或蚕豆(Vicla faba 染色体数目2n=12) 等根尖为实验材料。
2试剂
95%乙醇、冰乙酸、石炭酸品红、l mol/L HCl。
3器材
恒温培养箱、显微镜、水浴锅、载玻片、盖玻片、单面刀片、镊子、培养皿、量筒、吸水纸。
操作方法
1生根
植物根尖是植物的分生组织,取材容易,操作方便。植物根尖细胞分裂旺盛,因此,它是细胞有丝分裂相制备与观察的理想选取部位。大蒜、洋葱易于在水培、沙培、土培条件下生根。采用水培时要注意在暗处培养,以满足根生长条件,使根系生长旺盛。玉米和蚕豆种子可先用温水浸泡1天之后,再转入铺有多层吸水纸或纱布的培养皿中,上面盖双层湿纱布置于24~26℃温箱中培养,每天换水二次。
2取材
待根长至l.5~2.0 cm时,将根取下。若实验只需观察细胞有丝分裂的过程和各时期的特征,可将根尖直接放入Carnoy固定液(95%乙醇:冰乙酸=3:1)中固定;如果要观察染色体形态和数目,则必须对根尖进行前处理后才能固定。取材和固定必须要在细胞分裂高峰期进行,即分裂细胞占细胞总数最大值时进行,这样分裂细胞比例大,便于选择和观察。
不同的植物在不同的环境条件,其细胞分裂高峰的时间是不同的。大蒜和洋葱的细胞分裂高峰期通常是在上午9~11点,下午15~17点左右。
3前处理
前处理的方法一般采用低温处理和化学药剂处理。
(1)低温处理:将取材的根尖放入盛有蒸馏水的烧杯或其它容器内,放在1~4℃的冰箱或其它低温条件下处理24h。不同的植物对低温的敏感程度不同,效果也不同。对低温较为敏感的植物是小麦。
(2)化学药剂处理:常用的药剂有0.05%~0. 1%的秋水仙素水溶液;饱和对二氯苯溶液;0.002~0.004 mo1/L 8—羟基喹啉等。
秋水仙素溶液对纺锤体的抑制效果最好,一般在室温条件下处理2~4h可达到理想的效果。如果处理时间过长,染色体会变得更短,不利于对染色体结构进行研究。
对二氯苯和8—羟基喹啉对不同的植物效果也不相同。植物染色体数目多,个体小的适合于使用对二氯苯;而染色体中等长度的更适合于8—羟基喹啉,同时能使缢痕区更为清晰。
4 固定
固定是指用化学药剂将细胞迅速杀死的过程。固定的目的是为了把细胞生活状态的真实情况保存下来,避免在对细胞操作中使生活状态发生改变。植物常用的固定剂是Carnoy固定剂。Carnoy固定剂是用3份95%的乙醇和1份冰乙酸配制成的。这二种药品都具有迅速穿透细胞致细胞死亡的特点,但是乙醇是脱水剂,可使细胞脱水变形;冰乙酸又是一种膨胀剂,可使细胞膨胀改变生活状态,把这二种药品按照3:l配制使用,既可达到迅速杀死细胞又可保持细胞真实生活状态的目的。
固定的时间可根据被固定的材料大小而定,根尖组织固定4~24h可达到固定效果。固定时间过长,可去掉细胞中的一些脂肪油滴等,便于染色体观察。但是由于固定时间过长,材料易变脆、变硬,给实验操作带来一定困难。
5解离
解离的目的是将分生组织细胞之间的果胶质和纤维素等物质破坏掉,便于在制片过程中细胞容易散开。常用的解离方法有二种:
(1)酸解:将l mol/L HCl放在60℃恒温水浴锅中预热,当HCl温度达到60℃时,将根尖放入HCl溶液中。解离的时间要根据材料来确定。大蒜、洋葱是百合科植物,纤维素、果胶质的含量相对较低,解离时间约为4~5min。如果是禾本科植物的根尖,酸解时间要相对加长些。解离时要注意观察,
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