《利用熏蒸法测不同浓度薰衣草精油对褐腐的抑制效果微生物自主实验.docVIP

实验名称：利用熏蒸法测不同浓度薰衣草精油对褐腐的抑制效果 利用熏蒸法测不同浓度薰衣草精油对褐腐的抑制效果 实验目的 1.利用滤纸片法测不同浓度的薰衣草精油对褐腐的抑制效果。 2.寻找一种安全有效，无公害的化学杀菌剂的替代品或部分替代品具有一定的实用性和经济价值。 3.从环境保护的角度来讲，应用具抗菌作用的植物提取物来替代或部分替代化学杀菌剂对水果的采后保鲜无疑是一种既经济又安全的措施。 4.可以很好的保证水果在长距离运输中保鲜期更久一些。 二．实验原理 1.精油是以一种膜破坏剂的形式发挥作用，通过破坏膜结构，使霉菌细胞内物质泄露，刺激细胞自溶，导致细胞形态发生变化。 2.精油还能抑制微生物呼吸途径中内线粒体酶，脱氢酶的活性，从而影响细胞呼吸作用及一些代谢物质的合成，使微生物不能正常繁殖。 三．实验材料 PDA培养基 滤纸片 薰衣草精油 灭菌打孔器 灭菌的培养皿 褐腐病原菌 酒精灯 镊子 塑料膜 记号笔 酒精 实验内容 1.制作ＰＤＡ培养基： 秤取琼脂２０ｇ，葡萄糖２０ｇ，土豆２００ｇ，量取２５０ｍｌ的蒸馏水，将琼脂煮溶，用玻璃棒不停搅拌，防止其粘黏烧杯底部，煮至其成滴水状后冷却一会儿，土豆切成小块与蒸馏水煮面，期间要用玻璃棒不停搅拌，防止其粘锅，然后倒入烧杯冷却，准备好干净的纱布、烧杯，将土豆汤倒入纱布，取其过滤液，然后将滤液倒入溶好的琼脂中，然后，将葡萄糖倒入其中，不停搅拌，使其均匀，然后倒入锥形瓶中，封口，然后进行高压灭菌。 2.高压灭菌的使用： 打开电源，打开开关，查看其水位情况，若不是高水位，取蒸馏水沿其壁缓缓填至高水位，若是高水位，将试验中需要使用的装有PDA培养基的锥形瓶，培养皿，镊子，打孔器排好放入其中，盖好盖子，双手同时拧，用力要相同，然后调好温度设置时间，二十到三十分钟即可。 将融化的PDA培养基冷却到四十摄氏度左右，然后倒平板，再用无菌打孔器在培养基上取直径为5mm的褐腐菌块放入倒好的已经凝固的平板内，取直径为5mm的无菌滤纸片放在平板盖子中央，用移液器添加一定量的精油到滤纸上，使精油挥发物的最终浓度分别达到1ul 2ul 3ul 4ul 5ul 并且设置对照组为ck,每个浓度三个平板，实验重复三次，以不加精油为对照，迅速用保鲜膜密封与28摄氏度培养五天后观察结果，用十字交叉法测量菌落生长直径。 抑菌率（％）=（对照菌落直径-处理菌落直径)×100/(对照菌落直径-5mm) 实验结果展示 薰衣草－－褐腐　11月11号做－－11月16好测　（mｍ） 梯度　　平板 １ ２ ３ 均值 ｃｋ ６３ ５８ ６０ ６０．３ １ ５ ３２ ３２ ３２ ２ ５ ２３ ３３ ２８ ３ ５ ５ ５ ５ ４ ５ ５ ５ ５ ５ ５ ５ ５ ５ . 滤纸片法测定薰衣草精油对褐腐生长的抑制作用 图1；不同浓度薰衣草精油对褐腐菌的熏蒸抑制效果图 图2；不同浓度薰衣草精油对褐腐菌的熏蒸抑制效果图 六．实验结果分析 研究了不同浓度薰衣草精油对褐腐菌的熏蒸抑制效果，实验结果表明，在体外熏蒸条件下，不同浓度的薰衣草精油均对褐腐病原菌有不同程度的抑菌效果，且随浓度的增加抑制效果越明显。 熏蒸条件下薰衣草精油菌生长的影响薰衣草精油的体外熏蒸效果如表1和图所示，的薰衣草精油可以完全抑制的生长（表1）。当对照菌苔直径为 mm时，的平板中菌苔的直径仅为3mm左右，抑制率为%，浓度为的薰衣草精油就能完全抑制待测菌菌的生长（图）。根据实验数据绘制曲线 图薰衣草精油对的熏蒸抑制效果 CK 1μl 2μl 3μl 4μl 5μl