離子及药物对离体蛙心脏活动得影响.docVIP

一 实验目的 1、学习制备离体蛙心脏及离体心脏灌流的方法。 2、观察钠离子、钾离子、钙离子3种离子，去甲肾上腺素、乙酰胆碱、温度、酸碱度等因素对心脏活动的影响。 3、通过实验使学生初步对递质、受体、受体兴奋剂及受体阻断剂的概念有所感知。 二 实验原理 心脏正常的节律性活动必须在适宜的理化环境中进行，一旦适宜的环境被破坏，例如酸碱度及离子浓度的急剧改变等，心脏的活动就会受到影响。在整体内，心脏的活动受自主神经的双重支配，交感神经兴奋时，其末梢释放去甲肾上腺素，使心肌收缩力量增强，心率加快；而迷走神经兴奋时，其末梢释放乙酰胆碱，使心肌收缩力量减弱，心率减慢。强心甙类药物能够增强心肌收缩能力，减慢心率。 青蛙心脏离体后，用理化特性近似于血浆的任氏液灌流，在一定时间内，可保持其比较稳定的节律性收缩和舒张。改变任氏液的组成成分，如改变Na+﹑K+﹑Ca2+ 的浓度及酸﹑碱度等，心脏跳动的频率和幅度就会发生相应的改变。当血钾离子过高时，心肌兴奋性、自律性、传导性和收缩性均降低，表现为收缩力减弱、心动过缓和传导阻滞，严重时心脏可停搏于舒张期。而血钙离子升高时，心肌收缩力增强，但过高时可使心室停搏于收缩期。而血钙离子降低时，心肌收缩力减弱。血钠离子轻微变化对心肌影响不明显，只有发生明显变化时才会影响心肌的生理特性，钠离子剧烈升高时心脏的兴奋性和自律性虽升高，但兴奋的传导性和收缩性却下降，严重时可使心脏停搏于舒张期。 三 使用仪器、材料 1、实验仪器：生物信号采集处理系统，张力换能器，小动物手术器械，蛙板，细线，滴管，烧杯，蛙心夹，蛙心插管，滴管，万能支架等 2、实验材料：0.4%肝素-任氏液插管用，任氏液，0.65%氯化钠，2%氯化钙，1%氯化钾，1%乳酸，2.5%碳酸氢钠，1：10000肾上腺素，1：10000乙酰胆碱，1：5000阿托品等溶液 四. 实验步骤 1、双毁髓法处死青蛙 2、蛙类离体心脏制备 3、实验装置连接 4、记录不同离子及药物对心脏收缩的影响 先描记正常的蛙心搏动曲线作为对照，注意观察心搏频率、心室的收缩和舒张程度。然后依次把NaCl溶液、CaCl2溶液、KCl溶液、肾上腺素、乙酰胆碱、NaHCO3溶液、乳酸，阿托品（最后）灌到离体蛙心中，观察心搏曲线变化。 实验结果及分析 （1）Na+对蛙类离体心脏活动的影响 如下图所示，曲线的疏密：反映心跳的频率（心率cadiac rhythmicity,CR）；曲线的规律性：反映心跳的节律；曲线的幅度：反映心肌收缩的强弱（心肌收缩能力cardiac contractility,CT）。 (g) 图一 Na+对蛙类离体心脏活动的影响（2.5s/Div） 分析：由图一可以看出，当任氏液换为0.65%NaCl溶液后，蛙的心搏曲线的基线下降，心肌的收缩力减弱，心肌细胞的兴奋-收缩偶联在很大程度上依赖于胞外内流的Ca2+，说明Na+阻碍Ca2+的内流，对蛙类心脏的收缩性起抑制作用。同时Na+内流加速，自动除极速度加快，故自律性增强，心率提高。 （2）Ca2+对蛙类离体心脏活动的影响 如图二所示，当任氏液中加入Ca2+后，蛙的心搏曲线的基线明显上升，说明Ca2+对蛙类心脏的收缩性起促进作用，使心脏的收缩力增强。而心搏曲线疏密程度变化不大，说明对心率的影响不大。加入Ca2+前后心搏曲线规律性变化不大，说明对心跳的节律影响也不大。 （g） 图五 乙酰胆碱（ACh）对蛙类离体心脏活动的影响（2.5s/Div） 分析：加入乙酰胆碱后，心脏收缩力减弱，心率减慢。但乙酰胆碱浓度过高，标本活性下降，使得心脏完全停跳。乙酰胆碱能与心肌细胞膜上的M型的胆碱能受体结合，从而使腺苷酸环化酶抑制，细胞内的cAMP浓度降低。乙酰胆碱抑制钙离子通道，Ca2＋内流减少，导致心肌收缩力减弱。 （6）乳酸对蛙类离体心脏活动的影响 如图六所示，在任氏液中加入乳酸后，蛙的心搏曲线的基线呈非常明显的下降趋势，说明酸可对蛙类心脏的收缩起抑制作用，且抑制作用较大。同时可以看到，蛙的心搏曲线明显的由密变疏，说明H+能使蛙的心率减慢，且程度比较大。 （g） 图六 乙酰胆碱（ACh）对蛙类离体心脏活动的影响（2.5s/Div） 分析：加入酸溶液，H+浓度增加，可竞争性抑制钙离子与肌钙蛋白结合；使肌凝球蛋白ATP酶活性降低；使钙离子从肌浆膜释放减少，抑制钙离子释放；降低钙离子通道活性，使钙离子内流减少，所以抑制心脏收缩活动，幅度降低，心率减慢，基线下降。 (7) NaHCO3对蛙类离体心脏活动的影响 从图七可看出，加入碱后，蛙的心搏曲线基线明显上升，说明蛙心收缩能力得到恢复，同时心搏曲线由疏变密，说明蛙心心率加快。 图七 NaHCO3对蛙类离体心脏活动的影响（2.5s/Div）