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基因工程8.2[精选]
4下列说法正确的是 ( ) A.DNA连接酶最初是从人体细胞中发现的 B.限制酶的切口一定是GAATTC碱基序列 C.质粒是基因工程中唯一用做运载目的基因的运载体 D.利用运载体在宿主细胞内对目的基因进行大量复制的过程可称为“克隆” 5质粒是基因工程最常用的运载体,它的主要特点是 ( ) ①能自主复制 ②不能自主复制 ③结构很小 ④蛋白质 ⑤环状RNA分子 ⑥环状DNA ⑦能“友好”地“借居” A.①③⑤⑦ B.②④⑥ C.①③⑥⑦ D.②③⑥⑦ 2、将目的基因导入动物细胞 ①方法:显微注射法 ②程序: 归纳: 基因工程的基本操作程序 获取目的基因 鸟枪法 利用PCR 化学方法人工合成 构建基因表达载体 目的基因、启动子、终止子、标记基因 将目的基因导入受体细胞 农杆菌转化法、显微注射法 目的基因的检测与鉴定 检测:是否插入、转录、翻译 鉴定: 3、将目的基因导入微生物细胞 ①原核生物特点:繁殖快、单细胞、 遗传物质少 ②方法: 用CaCl2处理细菌 感受态细胞 表达载体与感受态细胞混合 感受态细胞吸收DNA分子 四。目的基因的检测与目的基因的表达的比较 目的基因的检测 目的基因的表达 检测目的 目的基因是否已被导入受体细胞 目的基因是否已表达过程 检测依据 受体细胞是否具有运载体特有的标记基因所控制的性状 受体细胞是否表现出目的基因所控制表达的性状 结果确认 受体细胞表现出运载体特有的标记基因所控制的性状,即可确认目的基因已被导入受体细胞 受体细胞表现出目的基因所控制的改善,即合成相应的蛋白质,便可确认目的基因已表达 目的基因的检测 目的基因的表达 方法: 抗原--抗体杂交(如标记基因为抗青霉素基因时,可使受体细胞处于含青霉素的液体中检测) 抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等(如施放棉铃虫到抗虫棉上检验) * * * * * * * * DNA限制酶、连接酶 基因操作的工具 连接的部位: 1)以下说法正确的是 ( ) A、所有的限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列 B、质粒是基因工程中唯一的运载体 C、运载体必须具备的条件之一是:具有多个限制酶切点,以便与外源基因连接 D、基因控制的性状都能在后代表现出来 C 练习 2)不属于质粒被选为基因运载体的理由是 A、能复制 B、有多个限制酶切点 C、具有标记基因 D、它是环状DNA D 练习 3有关基因工程的叙述中,错误的是( ) A、DNA连接酶将黏性末端的碱基对连接起来 B、 限制性内切酶可用于目的基因的获得 C、目的基因须由运载体导入受体细胞 D、 人工合成目的基因不用限制性内切酶 A D C 1、目的基因的获取 2、基因表达载体的构建 3、将目的基因导入受体细胞 4、目的基因的检测与鉴定 基因工程基本操作的四个步骤 有了目的基因,我们才能赋予一种生物以另一种生物的遗传特性。 使目的基因在受体细胞中稳定存在,并可进行遗传、表达和发挥作用 载体进入受体细胞稳定表达,才能实现一种生物的基因在另一种生物中的转化。 才能确定目的基因是否真正在受体细胞中稳定遗传和正确表达。 步骤一:目的基因的获取 目的基因的提取方法: 直接分离基因 人工合成基因 鸟枪法 从基因文库中获取 cDNA文库 反转录法合成DNA 根据已知的氨基酸序列合成DNA 基因组文库 目的基因主要是指______________________ 编码蛋白质的结构基因 例如:抗虫基因,荧光蛋白基因等 1. 鸟枪法(散弹射击法) 用限制酶将供体细胞中 的DNA切成许多片段, 从中找出含有目的基因。 故:鸟枪法多用于原核生物,不适用于真核生物 思考:用鸟枪法产生的真核细胞基因与原核细胞基因结构上有何区别?有何影响? 2.人工合成基因法(多用于真核生物) ①反转录法: 以目的基因转录成的信使RNA为模板,反转录成 互补的单链DNA,然后在酶的作用下合成双链 DNA,从而获得所需的基因。 目的基因的 mRNA 单链DNA (cDNA) 反转录 双链DNA (目的基因) 合成 2.人工合成基因法(多用于真核生物) ②根据已知的氨基酸序列合成DNA法
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